人體食管癌組織提取物說明書

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人體食管癌組織提取物【Cancer: Human Esophageal Cancer Derivatives】

食管癌是發生在食管上皮組織的惡性腫瘤，按組織學可以分為鱗狀細胞癌、腺癌和未分化癌三種。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體食管癌組織中高質量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫院，采集工作根據IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養方法；

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項；

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

RuBP 1,5-二磷酸核酮糖   mgEnrofloxacin936-恩諾沙星

Safranin O 番紅O；藏紅T   5gMequindox132977乙酰甲喹

SDS 十二烷基硫酸鈉   0g/2g/0gSulfamonomethoxine123磺胺間甲氧嘧啶

Silwet L7   ml /ml Sulfamonomethoxine 3068磺胺間甲氧嘧啶鈉

Skim Milk 脫脂奶粉   gLincomycin1541林可霉素
Empagliflozin  864070-44-0  中文名：依帕列凈  分子式：C23H27ClO7  度：95.0%      大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISAKit  

Emodin  518-82-1  中文名：大黃素  分子式：C15H10O5  度：99.0%  關鍵詞：  抗菌; 抗腫瘤; 導瀉; 酸模屬; 大黃屬; 決明屬; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠抗核抗體(ANA)ELISAKit  

Eleutheroside C  15486-24-5  中文名：  分子式：C8H16O6  度：97.5%  關鍵詞：  中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)ELISAKit              

Edaravone  89-25-8  中文名：依達拉奉  分子式：C10H10N2O  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠上腺髓質素elisa試劑盒   小鼠上腺髓質素試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠上腺髓質素試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠上腺髓質素試劑盒、小鼠上腺髓質素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Echinoynethiophene A  64165-98-6  中文名：  分子式：C13H10O2S  度：98.5%  關鍵詞：  華東藍刺頭; 闊苞菊; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠上腺素elisa試劑盒   小鼠上腺素試劑盒   規格型號：96T/48T   小鼠上腺素試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠上腺素試劑盒、小鼠上腺素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。
人參二醇(標準品)  Panaxadiol  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠肌肌酸激酶(CKM)ELISA試劑盒 ，英文名： CKM ELISA Kit

人參三醇(標準品)  Panaxatriol  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠肌腱蛋白X(TNX)ELISA試劑盒 ，英文名： TNX ELISA Kit

人參皂苷CK(標準品)  Compound K  質量規格：HPLC≥97%，標準品 小鼠肌侵蛋白(MTPN)ELISA試劑盒 ，英文名： MTPN ELISA Kit

人參皂苷F1(標準品)  Ginsenoside F1  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人參皂苷F2(標準品)  Ginsenoside F2  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠肌球蛋白(MYS)ELISA試劑盒 ，英文名： MYS ELISA Kit

人參皂苷Rb1(標準品)  Ginsenoside Rb1  質量規格：HPLC≥98%,標準品 小鼠肌球蛋白ⅠA(MYO1A)ELISA試劑盒 ，英文名： MYO1A ELISA Kit

人參皂苷Rb2（標準品）  Ginsenoside Rb2  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠肌球蛋白ⅤA(MYO5A)ELISA試劑盒 ，英文名： MYO5A ELISA Kit

人參皂苷Rb3(標準品)  Ginsenoside Rb3  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠肌球蛋白重鏈(MHC)ELISA試劑盒 ，英文名： MHC ELISA Kit

人參皂苷Rc(標準品)  Ginsenoside Rc  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠肌球蛋白重鏈1(MYH1)ELISA試劑盒 ，英文名： MYH1 ELISA Kit

人參皂苷Rd(標準品)  Ginsenoside Rd  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠肌球蛋白重鏈2(MYH2)ELISA試劑盒 ，英文名： MYH2 ELISA Kit
人體食管癌組織提取物說明書兔透明質酸(HA)ELISA試劑盒     5-Benzyl L-glutamate  中文名：L-谷氨酸5-芐酯  分子式：C12H15NO4  度：98.0%

兔銅藍蛋白(CP)ELISA試劑盒              5-Benzyl L-glutamate  中文名：L-谷氨酸5-芐酯  分子式：C12H15NO4 

兔糖化血紅蛋白A1celisa試劑盒   兔糖化血紅蛋白A1c試劑盒   規格型號：96T/48T   兔糖化血紅蛋白A1c試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔糖化血紅蛋白A1c試劑盒、兔糖化血紅蛋白A1c elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  5-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-glutamate  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸-5-芐酯  分子式：C17H23NO6  度：98.0%

兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISAKit                 4-Bromomethyl-2-cyanobiphenyl  中文名：  分子式：C14H10BrN 

兔胎盤生長因子elisa試劑盒   兔胎盤生長因子試劑盒   規格型號：96T/48T   兔胎盤生長因子試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔胎盤生長因子試劑盒、兔胎盤生長因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。     5-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-glutamate  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-谷氨酸-5-芐酯  分子式：C17H23NO6

注意事項；

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。