人體子宮癌組織提取物

人體子宮癌組織提取物【Cancer: Human Uterine Cancer Derivatives】

子是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。是指發(fā)生在子宮部及宮頸管的惡性腫瘤。的轉(zhuǎn)移，可向鄰近組織和器官直接蔓延，向下至穹窿及壁，向上可侵犯子宮體，向兩側(cè)可侵犯盆腔組織，向前可侵犯膀胱，向后可侵犯直腸。也可通過(guò)淋巴管轉(zhuǎn)移至宮頸旁、髂內(nèi)、髂外、腹股溝淋巴結(jié)，晚期甚至可轉(zhuǎn)移到鎖骨上及全身其他淋巴結(jié)。血行轉(zhuǎn)移比較少見(jiàn)，常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移部位是肺、肝及骨。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍人體子宮癌組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

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細(xì)胞培養(yǎng)方法；
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)；

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書(shū)要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項(xiàng)；

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

Paclobutrazol/多效唑   1g 3-Benzofurancarboxaldehyde468753-甲醛

PDA培養(yǎng)基/馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基   2g 2-n-Propyl-methyl-(1-methylbenzimidazole-yl)benzimidazole1526282

Penicillin G  salt青霉素G鈉鹽   5g /g /25g 2-Chloro1-cyclopentylH-benzo[e]pyrimido[5,4-b][1,4]diazepin(11H)-one15211973

PEPCase 磷酸烯醇式酸羧化酶   1KU Ethyl2-bromoH-thieno[3,2-b]pyrrole-carboxylate238742-溴H-噻吩并[3,2-B]-羧酸乙酯

PEP-CHA 磷酸烯醇式酸單環(huán)己胺鹽   0mg 5'-Deoxy-fluorocytidine663358
D-Mannitol diacetonide  1707-77-3  中文名：  分子式：C12H22O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠0脂酰肌醇抗體elisa試劑盒   小鼠0脂酰肌醇抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠0脂酰肌醇抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠0脂酰肌醇抗體試劑盒、小鼠0脂酰肌醇抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

DL-Alanyl-DL-Mine  1999-43-5  中文名：DL-丙氨酰-DL-蛋氨酸  分子式：C8H16N2O3S  度：99.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠細(xì)胞因子elisa試劑盒   小鼠細(xì)胞因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠細(xì)胞因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠細(xì)胞因子試劑盒、小鼠細(xì)胞因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

DL-2-Amino-n-octanoic acid  644-90-6  中文名：DL-2-氨基正辛酸  分子式：C8H17NO2  度：98.0%      小鼠狀腺原酸(T3)ELISAKit  

Diphenhydramine hydrochloride  147-24-0  中文名：鹽酸苯海拉明  分子式：C17H22ClNO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISAKit  

Dioxopromethazine hydrochloride  15374-15-9  中文名：鹽酸二氧丙嗪  分子式：C17H21ClN2O2S  度：99.0%      小鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)ELISAKit
瓊脂糖(Biowest,電泳級(jí));西班牙瓊脂糖  Agarose  質(zhì)量規(guī)格：進(jìn)口原裝Biowest 111860;電泳級(jí) 大鼠整合素αM型((ITG αM/CD11b)試劑盒 Rat Iegrin αM,ITG/CD11b ELISA Kit

聚乙二醇400  PEG 400  質(zhì)量規(guī)格：BR 大鼠整合素樣金屬蛋白酶17(ADAM17)試劑盒 Rat ADAM metallopeptidase domain 17,ADAM17 ELISA kit

消膽胺樹(shù)脂;考來(lái)烯胺  Cholestyramine resin  質(zhì)量規(guī)格：Each g exchanges 1.8 g- 2.2 g of  glycocholate 大鼠正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RAES/CCL5)試劑盒 Rat RAES ELISA kit

蔗糖  Sucrose  質(zhì)量規(guī)格：分子生物學(xué)級(jí) 大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratlipoproteinα,Lp-αELISAKit 96T/48T

D-海藻糖二水  D-(+)-Trehalose, dihydrate   質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR 大鼠脂蛋白α(Lp-α)試劑盒 Rat lipoprotein α,Lp-α ELISA Kit

氯化鈉   chloride  質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR 大鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratlipoproteinlipase,LPLELISAKit 96T/48T

鹽酸胍  Guanidine hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：>99%,分子生物學(xué)級(jí) 大鼠脂蛋白脂酶(LPL)試劑盒 Rat lipoprotein lipase,LPL ELISA Kit

側(cè)金盞花醇,阿東糖醇,核糖醇  Adonitol  質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC) ,進(jìn)口 大鼠脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISAKit 96T/48T

酵母浸粉；酵母粉  Yeast extract  質(zhì)量規(guī)格：FMB Grade 大鼠脂蛋脂酶A2(Lp-PLA2)試劑盒 Rat lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PLA2 ELISA Kit

核糖核酸酶 A 溶液  RNase A Solution  質(zhì)量規(guī)格：分子生物學(xué)級(jí),>60 U/mg,10 mg/ml 大鼠脂多糖/內(nèi)(LPS)試劑盒 Rat Lipopolysaccharides,LPS ELISA Kit
人體子宮癌組織提取物兔子白介素3(IL-3)ELISA試劑盒     6-Chloroguanine riboside  中文名：6-氯鳥(niǎo)嘌呤核苷  分子式：C10H12ClN5O4  度：95.0%

兔子白介素3(IL-3)ELISAKit     6-Benzyloxypurine  57500-07-9  中文名：6-芐氧基嘌呤  分子式：C12H10N4O  度：98.0%   

兔子白介素2elisa試劑盒   兔子白介素2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子白介素2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子白介素2試劑盒、兔子白介素2elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  5-Ami-(2-hydroxyethyl)pyrazole  中文名：  分子式：C5H9N3O  度：98.0%

兔子白介素2(IL-2)ELISA試劑盒              6-Chloroguanine riboside  中文名：6-氯鳥(niǎo)嘌呤核苷  分子式：C10H12ClN5O4 

兔子白介素1可溶性受體I(IL-1sRⅠ)ELISAKit     6-Benzyloxyindole  15903-94-3  中文名：6-芐氧基吲哚  分子式：C15H13NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：