大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞提取物培養(yǎng)

大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞提取物【Rat Aorta: Normal Aortic Smooth Muscle Cell Derivatives】

大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞提取物是從大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞提取的，大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞從正常大鼠主動(dòng)脈組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

含提取）2-Acetamido-deoxy-D-glucose75127N-乙酰氨基葡萄糖

狐貍源性成分單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒（定量）（不含提482-Amino-chloro,4-naphthoquinone279712-氨基-氯,4-萘醌

取）2-Amino-chlorobenzothiazole9542-氨基-氯苯并噻唑

DNA 提取試劑盒（過柱法-熒光配套）（專門配套億森寶48Solvent Yellow 3976溶劑黃

熒光PCR 檢測(cè)試劑盒用于微生物及動(dòng)物組織樣本的DNA3-Acetylcoumarin394963-乙酰基香豆素
Human ubiquitin ligase (E3/UBPL) ELISA Kit 人泛素連接酶(E3/UBPL)ELISA試劑盒  2-Amino-3-hydroxyanthraquinone  中文名：2-氨基-3-羥基蒽醌  分子式：C14H9NO3 

Human ubiquitin decomposition enzyme (DUB) ELISA Kit 人泛素分解酶(DUB)ELISA試劑盒  2-Amino-6-chloropurine  10310-21-1  中文名：2-氨基-6-氯嘌呤  分子式：C5H4ClN5 

Human ubiquitin conjugating enzyme (E2/UBCE) ELISA Kit 人泛素結(jié)合酶(E2/UBCE)ELISA試劑盒  2-Amino-4'-fluorobenzophenone  中文名：  分子式：C13H10FNO 

Human ubiquitin activating enzyme (E1/UBAE) ELISA Kit 人泛素激活酶(E1/UBAE)ELISA試劑盒  2-Amino-5-nitrobenzophenone  1775-95-7  中文名：2-氨基-5-硝基二苯甲酮  分子式：C13H10N2O3 

Human thymus peptide five (TP-5) ELISA Kit 人胸腺五肽(TP-5)ELISA試劑盒  (1R,2S)-1-Amino-2-indanol  中文名：(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO
頭孢呋辛鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)  Cefuroxime    質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定 白三烯C4(LTC4)ELISA檢測(cè)試劑盒MonkeyLeukoieneC4,LT-C4ELISAKit 96T/48T

頭孢曲松鈉  Ceftriaxone    質(zhì)量規(guī)格：potency>980ug/mg,BR 包蟲抗體IgG(間接法二步法)

頭孢曲松鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ceftriaxone    質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 薄層色譜分析20樣本

頭孢他啶(含碳酸鈉)  Ceftazidime with  Carbonate   質(zhì)量規(guī)格：94.0-105.0%,USP,BR 冰凍切片中性脂質(zhì)蘇丹黑染色試劑盒50

頭孢唑啉鈉  Cefazolin   質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR 冰凍切片中性脂質(zhì)油紅O染色試劑盒50

頭孢唑啉鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）  Cefazolin   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品 冰凍切片總膽(酯酶法)菲律賓(FILIPIN)熒光染色試劑盒20

哌拉西林鈉  Piperacillin    質(zhì)量規(guī)格：>900μg//mg,USP,BR 冰凍切片總膽高氯酸萘醌(PAN)染色試劑盒50

哌拉西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)  Piperacillin    質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 冰凍切片總膽舒爾茨染色試劑盒50

環(huán)吡司胺; 環(huán)吡酮胺  Ciclopirox Olamine  質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) 冰凍切片總游離膽菲律賓(FILIPIN)熒光染色試劑盒50

環(huán)吡司胺; 環(huán)吡酮胺（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ciclopirox Olamine  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 冰凍切片總脂酶活性格莫瑞(Gomori)染色試劑盒50
大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞提取物培養(yǎng)人中性粒細(xì)胞防御素1-3(HNP1-3)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human HNP1-3 (Neuophil Peptide 1-3) ELISA Kit  2-Cyclopropyl-3-[(diphenylphosphinyl)methyl]-4-(4-fluorophenyl)quinoline  146578-99-6  中文名：  分子式：C31H25FNOP  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人中性粒細(xì)胞防御素1-3(HNP1-3)ELISAKit     2-Cyano-N-[4-(Trifluoromethyl)Phenyl]Acetamide  24522-30-3  中文名：  分子式：C10H7F3N2O  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶elisa試劑盒   人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶試劑盒、人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     2-Cyclopropyl-3-[(diphenylphosphinyl)methyl]-4-(4-fluorophenyl)quinoline  中文名：  分子式：C31H25FNOP 

人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒     2-C-Methyl-D-erythro,4-lactone  18465-71-9  中文名：  分子式：C5H8O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  臭常山; 絳三葉; 深紅三葉草; 菜豆; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

人中心體蛋白110(CEP110)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human CEP110 (Cenosomal Protein 110kDa) ELISA Kit  2-Aminoisonicotinic acid  13362-28-2  中文名：2-氨基異煙酸  分子式：C6H6N2O2

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。