大鼠主動脈平滑肌細胞提取物培養

大鼠主動脈平滑肌細胞提取物【Rat Aorta: Normal Aortic Smooth Muscle Cell Derivatives】

大鼠主動脈平滑肌細胞提取物是從大鼠主動脈平滑肌細胞提取的，大鼠主動脈平滑肌細胞從正常大鼠主動脈組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

含提取）2-Acetamido-deoxy-D-glucose75127N-乙酰氨基葡萄糖

狐貍源性成分單重熒光PCR檢測試劑盒（定量）（不含提482-Amino-chloro,4-naphthoquinone279712-氨基-氯,4-萘醌

取）2-Amino-chlorobenzothiazole9542-氨基-氯苯并噻唑

DNA 提取試劑盒（過柱法-熒光配套）（專門配套億森寶48Solvent Yellow 3976溶劑黃

熒光PCR 檢測試劑盒用于微生物及動物組織樣本的DNA3-Acetylcoumarin394963-乙酰基香豆素
Human ubiquitin ligase (E3/UBPL) ELISA Kit 人泛素連接酶(E3/UBPL)ELISA試劑盒  2-Amino-3-hydroxyanthraquinone  中文名：2-氨基-3-羥基蒽醌  分子式：C14H9NO3 

Human ubiquitin decomposition enzyme (DUB) ELISA Kit 人泛素分解酶(DUB)ELISA試劑盒  2-Amino-6-chloropurine  10310-21-1  中文名：2-氨基-6-氯嘌呤  分子式：C5H4ClN5 

Human ubiquitin conjugating enzyme (E2/UBCE) ELISA Kit 人泛素結合酶(E2/UBCE)ELISA試劑盒  2-Amino-4'-fluorobenzophenone  中文名：  分子式：C13H10FNO 

Human ubiquitin activating enzyme (E1/UBAE) ELISA Kit 人泛素激活酶(E1/UBAE)ELISA試劑盒  2-Amino-5-nitrobenzophenone  1775-95-7  中文名：2-氨基-5-硝基二苯甲酮  分子式：C13H10N2O3 

Human thymus peptide five (TP-5) ELISA Kit 人胸腺五肽(TP-5)ELISA試劑盒  (1R,2S)-1-Amino-2-indanol  中文名：(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO
頭孢呋辛鈉(標準品)  Cefuroxime    質量規格：效價測定 白三烯C4(LTC4)ELISA檢測試劑盒MonkeyLeukoieneC4,LT-C4ELISAKit 96T/48T

頭孢曲松鈉  Ceftriaxone    質量規格：potency>980ug/mg,BR 包蟲抗體IgG(間接法二步法)

頭孢曲松鈉（標準品）  Ceftriaxone    質量規格：HPLC>98%,標準品 薄層色譜分析20樣本

頭孢他啶(含碳酸鈉)  Ceftazidime with  Carbonate   質量規格：94.0-105.0%,USP,BR 冰凍切片中性脂質蘇丹黑染色試劑盒50

頭孢唑啉鈉  Cefazolin   質量規格：>95%,BR 冰凍切片中性脂質油紅O染色試劑盒50

頭孢唑啉鈉（標準品）  Cefazolin   質量規格：HPLC>95%,標準品 冰凍切片總膽(酯酶法)菲律賓(FILIPIN)熒光染色試劑盒20

哌拉西林鈉  Piperacillin    質量規格：>900μg//mg,USP,BR 冰凍切片總膽高氯酸萘醌(PAN)染色試劑盒50

哌拉西林鈉(標準品)  Piperacillin    質量規格：含量測定 冰凍切片總膽舒爾茨染色試劑盒50

環吡司胺; 環吡酮胺  Ciclopirox Olamine  質量規格：>99%,USP32,BR,可用于細胞培養 冰凍切片總游離膽菲律賓(FILIPIN)熒光染色試劑盒50

環吡司胺; 環吡酮胺（標準品）  Ciclopirox Olamine  質量規格：HPLC>98%,標準品 冰凍切片總脂酶活性格莫瑞(Gomori)染色試劑盒50
大鼠主動脈平滑肌細胞提取物培養人中性粒細胞防御素1-3(HNP1-3)酶聯吸附測定試劑盒   Human HNP1-3 (Neuophil Peptide 1-3) ELISA Kit  2-Cyclopropyl-3-[(diphenylphosphinyl)methyl]-4-(4-fluorophenyl)quinoline  146578-99-6  中文名：  分子式：C31H25FNOP  度：98.0%  關鍵詞： 

人中性粒細胞防御素1-3(HNP1-3)ELISAKit     2-Cyano-N-[4-(Trifluoromethyl)Phenyl]Acetamide  24522-30-3  中文名：  分子式：C10H7F3N2O  度：98.0%  關鍵詞： 

人中性粒細胞彈性蛋白酶elisa試劑盒   人中性粒細胞彈性蛋白酶試劑盒   規格型號：96T/48T   人中性粒細胞彈性蛋白酶試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人中性粒細胞彈性蛋白酶試劑盒、人中性粒細胞彈性蛋白酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。     2-Cyclopropyl-3-[(diphenylphosphinyl)methyl]-4-(4-fluorophenyl)quinoline  中文名：  分子式：C31H25FNOP 

人中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒     2-C-Methyl-D-erythro,4-lactone  18465-71-9  中文名：  分子式：C5H8O4  度：98.0%  關鍵詞：  臭常山; 絳三葉; 深紅三葉草; 菜豆; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

人中心體蛋白110(CEP110)酶聯吸附測定試劑盒   Human CEP110 (Cenosomal Protein 110kDa) ELISA Kit  2-Aminoisonicotinic acid  13362-28-2  中文名：2-氨基異煙酸  分子式：C6H6N2O2

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。