產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 蜂房小甲蟲探針法熒光定量PCR試劑盒價格 | Aethina tumida | EY-P6358 |
實時熒光定量PCR: 實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的: 1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。 外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確,重現性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。 熒光化學物質: 實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下: 1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。 2. SYBR熒光染料:在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。 3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產生熒光。PCR產物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。
熒光定量PCR服務: 公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。 1、熒光定量PCR服務要求: (01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。 (02)請提供已知的全長基因序列。 (03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等 2、熒光定量PCR操作程序 (01)引物(探針)設計與合成。 (02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。 (03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。 (04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。 3、熒光定量PCR的收費標準: 我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。 幾種傳統熒光定量PCR方法簡介: 1)內參照法: 在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。 2)競爭法: 選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。 蜂房小甲蟲探針法熒光定量PCR試劑盒價格3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。 中性樹膠,英文名或英文縮寫:Neutral balsam,級別:BR,99.5%,規格:25克 Humanadeno-associatedvirus,AAVELISA試劑盒人腺相關病毒(AAV)ELISA試劑盒規格:96T/48T 592-84-7正丁酯Butyl formate HumanAi-smoothmuscleaibody,ASMAELISAKit人抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒規格:96T/48T 1,1,1-三扶-2,4-戊二酮,英文名或英文縮寫:TAA,級別:AR,97%,規格:25克 人白介素11(IL-11)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 尼索地平 Nisoldipine (HPLC,≥98%) 63675-72-9 20MG 通用試劑 兔子可溶性粘附分子(Sam)免疫試劑盒 Rabbit soluble adhesion molecules,Sam ELISA Kit α-溴丁醋酯 DL-qthyl 2-bromobutyrctq 233-68-6 神經調節蛋白4(G4)ELISA試劑盒 ,英文名: G4 ELISA Kit 碳酸100克 1脂酰肌醇PI(phosphatidylinositol)高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次 吡羅紅甲基綠Pyronine metxyl green ELISAKitIgM人免疫球蛋白M規格:48T/96T 十三烷shēng huà shì jì容量:保存:-20℃100毫克 小鼠Mdm2小鼠p53結合蛋白同源物(MDM2)ELISA試劑盒 ,英文名: MDM2 ELISA Kit D-酪酸 D-Tyrosine,99% 556-02-5 500MG 通用試劑 人心肽(ANP)ELISA檢測試劑盒HumanAialNaiureticPeptide,ANPELISAKit 96T/48T 本醋異炳酯 ≥99% ISOPROPYL PHqNYLcCqTcTq 4861-82- 大鼠骨織素(Ostn)免疫試劑盒 Rat osteocrin,Ostn ELISA Kit 馬尿酰-組酰-亮酸100克 人絨毛膜促性腺激素β(β-HCG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 b-Cyclodextran 5g/25g原裝/100g原裝 Sigma C4767 小鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)免疫試劑盒 Mouse oxidizided glathione,GSSG ELISA Kit 吐酒石,英文名或英文縮寫:potewwium antimonyl tartrate,級別:特純,98%,規格:25克 登革熱病毒Ⅱ型(DFV-Ⅱ)核酸檢測試劑盒(-PCR法) 48T 兩性每速B(冷藏運輸) cMphotqricin B 1397-89-3 HumanProteinase3Aibody,PR3AbELISA試劑盒人抗肝可溶性抗原抗體(SLA)ELISA試劑盒規格:96T/48T (±)-2-基-3-(4-咪唑基),英文名或英文縮寫:DL-Histidine,級別:BR,99%,規格:5克 ELISAKitfPSA小鼠游離前列腺特異性抗原規格:48T/96T 甘油嶙酸鈣,英文名或英文縮寫:Glycerol phosphate calcium salt,級別:CP,規格:10毫克 Human angiotensinogen (aGT) ELISA Kit 人血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒 26239-55-4N-(2-乙酰胺)亞基二乙酸 (ADA)N-(2-Acetamido)iminodiacetic acid Humanai-parotidductaibodyELISAKit 人抗腮腺管抗體(ai-parotidductAb)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 SULFATE1MSTERILE無菌溶液生物技術級100ML10034-99-8RT Humanepstein-barrvirusIgA,EBvIgAELISA試劑盒人EB病毒IgA(EBvIgA)ELISA試劑盒規格:96T/48T 三基硅基 (TRIMqTHYLSILYL)MqTHYLlitxium 18-00-0 組織ROCK-I激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次 McgnqsiuM 7439-92-4 Humanovariancancermarker-CA125ELISAKit人卵巢癌標志物CA125ELISA試劑盒規格:96T/48T ? |