大鼠腸靜脈內皮細胞提取物胞培養

大鼠腸靜脈內皮細胞提取物胞【Rat Intestinal: Normal Intestinal Vein Endothelial Cell Derivatives】

大鼠腸靜脈內皮細胞提取物胞是從大鼠腸靜脈內皮細胞提取的，大鼠腸靜脈內皮細胞從正常大鼠腸靜脈組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

谷胱甘肽還原酶 GR   0U17-Ethylendioxyandrosta,4-dien-one2398317-亞乙二氧基-雄,4-二烯-酮

果膠酶Y3   0mg3β-Acetoxyα-androstan7β-ol03-乙?；?alpha;-雄烷二醇

過氧化氫酶 Catalase   1g 17β-Benzoyloxy-androsta,4-dien-one141617β-苯甲酰氧基-雄甾,4-二烯-酮

還原型谷胱甘肽(GSH)   1g/5g 5α-Androstaneβ,17β-diol575α-雄烷二醇

己糖激酶(HK)   25mg3-O-Methyl-methoxymaxterone92283-O-甲基-甲氧基α-雄烷二醇
Human pulmonary surfacta associated protein B (SP-B) ELISA Kit 人肺表面活性物質相關蛋白B(SP-B)ELISA試劑盒  2',3'-Di-O-acetyl-5'-deoxy-5-fluorocytidine  161599-46-8  中文名：  分子式：C13H16FN3O6 

Human pulmonary surfacta associated protein A (SP-A) ELISA Kit 人肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒  2,4-Bis(α,α-dimethylbenzyl)phenol  中文名：2,4-雙(α,α-二甲基苯甲基)苯酚  分子式：C24H26O 

Human plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) ELISA Kit 人纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒  1-Amino-4-hydroxyanthraquinone  116-85-8  中文名：1-氨基-4-羥基蒽醌  分子式：C14H9NO3 

Human plasminogen activator inhibitor (PAI) ELISA Kit 人纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒  1-Benzyl D-aspartate  中文名：D-天冬氨酸1-芐酯  分子式：C11H13NO4 

Human plasminogen activator (PLGA) ELISA Kit 人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒  1-Benzyl-5-ethoxyhydantoin  中文名：1-芐基-5-乙氧基海因  分子式：C12H14N2O3
通關藤苷X HPLC≥98% 20mg MouselymphocytefactorELISA試劑盒小鼠細胞因子ELISA試劑盒規格：96T/48T

卡瓦黃素內酯B HPLC≥97% 20mg Mouselymphocytefunctionassociatedaigen3,LFA-3ELISA試劑盒小鼠細胞功能相關抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒規格：96T/48T

連翹酯苷I HPLC≥98% 5mg Mouselymphotactin,Lptn/LTNELISA試劑盒小鼠細胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒規格：96T/48T

連翹酯苷H HPLC≥98% 5mg MouseLysozyme,LZMELISA試劑盒小鼠溶菌酶(LZM)ELISA試劑盒規格：96T/48T

連翹酯苷F HPLC≥98% 5mg MouseLysozyme,LZMELISA試劑盒小鼠溶菌酶(LZM)ELISA試劑盒規格：96T/48T

甲基基苦參醇C HPLC≥98% 5mg MouseMacrophageColony-StimulatingFactor,M-CSFELISA試劑盒小鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒規格：96T/48T

苦參醇X HPLC≥98% 5mg MouseMacrophage-DerivedChemokine,MDCELISA試劑盒小鼠巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒規格：96T/48T

苦參醇W HPLC≥98% 5mg MouseMacrophageInflammatoryProtein1β,MIP-1βELISA試劑盒小鼠巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒規格：96T/48T

苦參醇N HPLC≥98% 5mg MouseMacrophageInflammatoryProtein1δ,MIP-1δELISA試劑盒小鼠巨噬細胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA試劑盒規格：96T/48T

苦參醇S HPLC≥98% 5mg MouseMacrophageInflammatoryProtein2,MIP-2ELISA試劑盒小鼠巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒規格：96T/48T
大鼠腸靜脈內皮細胞提取物胞培養人周期素依賴性激酶4(CDK-4)ELISA試劑盒     2-Hydroxyquinoxaline  1196-57-2  中文名：  分子式：C8H6N2O 

人周期素依賴性激酶2elisa試劑盒   人周期素依賴性激酶2試劑盒   規格型號：96T/48T   人周期素依賴性激酶2試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人周期素依賴性激酶2試劑盒、人周期素依賴性激酶2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  2-Hydroxyquinoxaline  中文名：  分子式：C8H6N2O  度：98.0%

人周期素依賴性激酶2(CDK2)酶聯吸附測定試劑盒   Human CDK2 (Cyclin Depende Kinase 2) ELISA Kit  2-Hydroxy-3-methylanthraquinone  17241-40-6  中文名：  分子式：C15H10O3 

人周期素依賴性激酶2(CDK-2)ELISA試劑盒     2-Hydroxy-3-methylanthraquinone  中文名：  分子式：C15H10O3  度：%

人周期素依賴性激酶2(CDK-2)ELISAKit     2-Methoxystypandrone  85122-21-0  中文名：  分子式：C14H12O5

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。