大鼠角膜組織提取物說明書

大鼠角膜組織提取物【Eye: Normal Rat Corneal Derivatives】

角膜組織是是位于眼球前壁的一層透明膜，為眼睛提供大部分屈光力。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠角膜組織中高質量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

5×A-plus MasterMix 5×加A反應液   次 4-Acetylbiphenyl9214-乙?；?/span>

5M 甜菜堿溶液 PCR級   5×1ml 4-Acetamidophenol對乙酰氨基酚

BSA溶液 PCR級   5×1ml 4-[2-[(3-Ethyl-methyl-oxo-pyrrolin-yl)carboxamido]ethyl]benzenesulfonamide11189

DMSO-PCR級   5×1ml 4-[2-(2-Amino,7-dihydro-oxoH-pymol[2,3-d]pyrimodin-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester155

dNTP mM   0.5ml4-[(4-Methylpiperazin-yl) methyl]benzoic acid dihydrochloride62619甲磺酸伊馬替尼
Capecitabine 2',3'-diacetate  162204-20-8  中文名：  分子式：C19H26FN3O8  度：98.0%  關鍵詞：    線粒體解偶聯蛋白2   英文名稱：   Mouse Mitochondrial Uncoupling Protein 2   規格：   48T/96T   英文縮寫：   UCP2

Capecitabine  154361-50-9  中文名：卡培他濱  分子式：C15H22FN3O6  度：98.0%  關鍵詞    小鼠細胞粘附分子-1   英文名稱：   vascuiar endothelial cells adhesion molecule 1   規格：   48T/96T   英文縮寫：   VCAM-1

Canrenone  976-71-6  中文名：坎利酮  分子式：C22H28O3  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠鳥酸脫羧酶   英文名稱：   Mouse Ornithine Decarboxylase   規格：   48T/96T   英文縮寫：   ODC

Candesartan methyl ester  139481-69-9  中文名：  分子式：C25H22N6O3  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠卵清蛋白特異性IgE   英文名稱：   Mouse ovalbumin specific Immunoglobulin E   規格：   48T/96T   英文縮寫：   OVA sIgE

Candesartan ethyl ester  139481-58-6  中文名：  分子式：C26H24N6O3  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠氧化低密度脂蛋白   英文名稱：   Mouse oxidized Low Density Lipoprotein   規格：   48T/96T   英文縮寫：   oxLDL
氯化飛燕草素,O二葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg RatCyclin-D2ELISAKit大鼠細胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒規格：96T/48T

氯化失車菊素,O雙葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg RatCyclin-D2ELISA試劑盒大鼠細胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒規格：96T/48T

二氫葫蘆素B HPLC≥95% 20mg RatCyclin-D3ELISAKit大鼠細胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規格：96T/48T

葫蘆素B OBetaD葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg RatCyclin-D3ELISA試劑盒大鼠細胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規格：96T/48T

甲基新苦木素 HPLC≥95% 20mg RatCyclosporineA,CsAELISAKit大鼠環孢素A(CsA)ELISA試劑盒規格：96T/48T

,二去氫隱丹參酮 HPLC≥95% 20mg RatCyclosporineA,CsAELISA試劑盒大鼠環孢素A(CsA)ELISA試劑盒規格：96T/48T

丹參二醇A HPLC≥95% 20mg RatCystatinC,Cys-CELISAKit大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒規格：96T/48T

丹參二醇B HPLC≥95% 20mg RatCystatinC,Cys-CELISA試劑盒大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒規格：96T/48T

丹參二醇C HPLC≥95% 20mg RatCytochrome-C,Cyt-CELISAKit大鼠細胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒規格：96T/48T

丹參酸甲酯 HPLC≥95% 20mg RatCytochrome-C,Cyt-CELISA試劑盒大鼠細胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒規格：96T/48T
大鼠角膜組織提取物說明書線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ活性測試盒   可見分光光度法   25管/24樣  Aurantio-obtusin  67979-25-3  中文名：橙黃決明素  分子式：C17H14O7 

線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ活性測試盒   可見分光光度法   25管/24樣  4,4'-Dimethoxytrityl chloride  中文名：4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷  分子式：C21H19ClO2  度：98.0%

線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ活性測試盒   可見分光光度法   25管/24樣  Aurantio-obtusin  67979-25-3  中文名：橙黃決明素  分子式：C17H14O7  度：99.0%  關鍵詞：  決明; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

線粒體呼吸鏈復合體Ⅱ活性測試盒   可見分光光度法   25管/24樣  4,5,6,7-Tetrahydrothieno [3,2,c]pyridine hydrochloride  28783-41-7  中文名：  分子式：C7H10ClNS 

線粒體復合物V蛋白共沉淀分析試劑盒5次  2,4-Dihydroxy-3-nitropyridine  89282-12-2  中文名：  分子式：C5H4N2O4  度：98.0%  關鍵詞：

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。