大鼠腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)

大鼠腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物【Rat Brain : Normal Cerebral Vascular Endothelial Cells Derivatives】

大鼠腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物是從大鼠原代腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取的，大鼠原代腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞從正常大鼠腦組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

弓形蟲(chóng)ELISA檢測(cè)試劑盒96Repaglinide13622瑞格列奈

狂犬病抗原膠體金快速檢測(cè)試紙條Repaglinide ethyl ester14776

狂犬病病毒ELISA試劑盒（定性）96Rengyol936755連翹環(huán)己醇

狂犬病病毒ELISA試劑盒（定量）96Rengynic acid5178838

犬瘟熱抗原膠體金快速檢測(cè)試紙條Rebeprazole 11797雷貝拉唑鈉
Human hepatocellular carcinoma aigen (PHC) ELISA Kit 人肝癌抗原(PHC)ELISA試劑盒  2-Acetamido-2-deoxy-D-glucose  中文名：N-乙酰氨基葡萄糖  分子式：C8H15NO6 

Human heparin cofactor II (HC II) ELISA Kit 人肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒  2-[2-(2,2,2-Trifluoroethoxy)phenoxy]ethyl methanesulfonate  中文名：  分子式：C11H13F3O5S 

Human heparin binding epidermal growth factor (HB-EGF) ELISA Kit 人肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)ELISA試劑盒  2-[(Acetylthio)methyl]-phenylpropionic acid  91702-98-6  中文名：  分子式：C12H14O3S 

Human hea fatty acid binding protein (h-FABP) ELISA Kit 人心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)ELISA試劑盒  (Z)-Lachnophyllum lactone  81122-95-4  中文名：  分子式：C10H10O2 

Human galanin / galanin (GAL) ELISA Kit 人甘肽/甘素(GAL)ELISA試劑盒  2-Amino-5-nitrothiazole  中文名：2-氨基-5-硝基噻唑  分子式：C3H3N3O2S
天麻素  Gastrodin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，BR 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒 ，英文名： TIMP-1 ELISA Kit

甜菊苷（標(biāo)準(zhǔn)品）  Stevioside  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousetissueinhibitorsofmetalloproteinase2,TIMP-2ELISAkit 96T/48T

土貝母苷甲（標(biāo)準(zhǔn)品）  Tubeimoside I  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA試劑盒 ，英文名： TIMP-2 ELISA Kit

土荊皮乙酸(標(biāo)準(zhǔn)品)  Pseudolaric Acid B  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousetissueinhibitorsofmetalloproteinase3,TIMP-3ELISAkit 96T/48T

土木香內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  Alantolactone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA試劑盒 ，英文名： TIMP-3 ELISA Kit

蛻皮激素（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ecdysterone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousetissueinhibitorsofmetalloproteinase4,TIMP-4ELISAkit 96T/48T

脫水穿心蓮內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dehydroandrographolide  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA試劑盒 ，英文名： TIMP-4 ELISA Kit

脫水穿心蓮內(nèi)酯琥珀酸半酯(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dehydroandrographolide succinate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(SDF1)ELISA試劑盒 ，英文名： SDF1 ELISA Kit

脫水羊藿素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Anhydroicaritin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseSomalcellderivedfactor1a,SDF-1aELISAKit 96T/48T

脫氧野尻霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)  1-Deoxynojirimycin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA試劑盒 ，英文名： SDF-1a/CXCL12 ELISA Kit
大鼠腦動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞提取物培養(yǎng)人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)ELISAKit     2-Methylanthraquinone  84-54-8  中文名：2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(lèi)(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA試劑盒     2-Methylsulfanylpyrimidin-4(3H)-one  5751-20-2  中文名：  分子式：C5H6N2OS 

人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(lèi)elisa試劑盒   人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(lèi)試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(lèi)試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(lèi)試劑盒、人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(lèi) elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  2-Methyl-4-nitrobenzoic acid  1975-51-5  中文名：  分子式：C8H7NO4  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(lèi)(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)ELISA試劑盒     2-Methylanthraquinone  中文名：2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O2  度：98.0%

人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)elisa試劑盒   人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)試劑盒、人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi) elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  2-Methyl-4-nitrobenzoic acid  1975-51-5  中文名：  分子式：C8H7NO4

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。