大鼠淋巴內皮細胞提取物說明書

大鼠淋巴內皮細胞提取物【Rat Lymph: Normal Endothelial Cells Derivatives】

大鼠淋巴內皮細胞提取物是從大鼠原代淋巴內皮細胞提取的，大鼠原代淋巴內皮細胞從正常大鼠淋巴組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

高分子量非變性電泳蛋白質Marker（6669 kD）   次 5-Benzimidazolecarboxylic acid1578865-苯并咪唑甲酸

堿性蛋白非變性電泳蛋白Marker   次 5-Azacytidine375-氮胞苷

寬分子量蛋白Marker（00KD）   次 5-Androstenβ-ol7-one ethyleneketal774

三色預染寬分子量蛋白質Marker（kD）   次/0元/2×次/0元/×次 5-Aminouracil93225-氨基尿嘧啶

雙色預染寬分子量蛋白Marker（KD）   次 5-Aminosalicylic acid8975-氨基水楊酸
Human fibronection related aigen (FRA) ELISA Kit 人纖維連接素相關抗原(FRA)ELISA試劑盒  17β-Benzoyloxy-androsta-1,4-dien-3-one  19041-66-8  中文名：17β-苯甲酰氧基-雄甾-1,4-二烯-3-酮  分子式：C26H30O3 

Human fibronectin (FN) ELISA Kit 人纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒  1-O-Methylnataloe-emodin  中文名：  分子式：C16H12O5 

Human fibromodulin (fibromodulin) ELISA Kit 人纖調蛋白(fibromodulin)ELISA試劑盒  2-(2,2-Dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl)propane-1,2-diol  129141-48-6  中文名：  分子式：C8H16O4 

Human fibromodulin (fgl2) ELISA Kit 人纖維介素蛋白(fgl2)ELISA試劑盒  1'-Acetonaphthone  中文名：1'-萘乙酮  分子式：C12H10O 

Human fibroblast surface aigen (FSP) ELISA Kit 人纖維母細胞表面抗原(FSP)ELISA試劑盒  17α-Neriifolin  中文名：  分子式：C30H46O8
替米沙坦酰基-β-D-葡萄糖苷酸  Telmisartan Acyl-β-D-glucuronide  質量規格：美國進口 英文名稱RatinhibinBELISAKit大鼠抑制素B(INHB)ELISA試劑盒規格：96T/48T

異-d4  Isoniazid-d4  質量規格：美國進口 英文名稱RatinhibinBELISAKit大鼠抑制素B(INHB)ELISA試劑盒規格：96T/48T

噻托銨-d3  Tiotropium-d3 Bromide  質量規格：美國進口 英文名稱RatInsulieceptorβ(ISR-β)ELISAKIT大鼠胰島素受體β(ISR-β)規格：96T/48T

去乙基鹽酸胺酮-d4  Desethyl Amiodarone-d4 Hydrochloride  質量規格：美國進口 英文名稱RatInsulieceptorβ(ISR-β)ELISAKIT大鼠胰島素受體β(ISR-β)規格：96T/48T

去乙基鹽酸胺酮  Desethyl Amiodarone Hydrochloride  質量規格：美國進口 英文名稱RatInsulinELISAKit大鼠胰島素(Insulin)ELISAKit規格：96T/48T

二-N-去乙基胺酮  Di-N-desethyl Amiodarone  質量規格：美國進口 英文名稱RatInsulinELISAKit大鼠胰島素(Insulin)ELISAKit規格：96T/48T

N-去甲基阿莫曲普坦  N-Desmethyl Almotriptan  質量規格：美國進口 英文名稱RatLaminaPropriaLymphocyteELISAKit大鼠脂蛋白脂酶(LPL)規格：96T/48T

阿莫曲普坦代謝產物M2  Almotriptan Metabolite M2  質量規格：美國進口 英文名稱RatLaminaPropriaLymphocyteELISAKit大鼠脂蛋白脂酶(LPL)規格：96T/48T

阿莫曲普坦-d6  Almotriptan-d6  質量規格：美國進口 英文名稱RatLBPELISAKit大鼠脂多糖結合蛋白(LBP)規格：96T/48T

阿莫曲普坦鹽酸鹽  Almotriptan Hydrochloride  質量規格：美國進口 英文名稱RatLDL-ICELISAKit大鼠低密度脂蛋白復合物(LDL-IC)規格：96T/48T
大鼠淋巴內皮細胞提取物說明書人轉化生長因子β2(TGF-β2)酶聯吸附測定試劑盒   Human TGF-β2 (ansforming Growth Factor β2) ELISA Kit  2-Naphthyl N-benzoylphenylalaninate  15873-25-3  中文名：2-萘基N-苯甲酰基苯丙氨酸酯  分子式：C26H21NO3  度：98.0%   

人轉化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒              3-(3-Chloropropyl)-1,3-dihydro-7,8-dimethoxy-2H-3-benzazepin-2-one  中文名：  分子式：C15H18ClNO3 

人轉化生長因子β1elisa試劑盒   人轉化生長因子β1試劑盒   規格型號：96T/48T   人轉化生長因子β1試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人轉化生長因子β1試劑盒、人轉化生長因子β1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  2-Naphthyl N-benzoylphenylalaninate  中文名：2-萘基N-苯甲酰基苯丙氨酸酯  分子式：C26H21NO3  度：98.0%

人轉化生長因子αelisa試劑盒   人轉化生長因子α試劑盒   規格型號：96T/48T   人轉化生長因子α試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人轉化生長因子α試劑盒、人轉化生長因子α elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。     2-Naphthyl N-benzoylphenylalaninate  中文名：2-萘基N-苯甲酰基苯丙氨酸酯  分子式：C26H21NO3 

人轉化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒     2-Methylsulfanylpyrimidin-4(3H)-one  5751-20-2  中文名：  分子式：C5H6N2OS  度：98.0%  關鍵詞：

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。