人體視網(wǎng)膜組織提取物

人體視網(wǎng)膜組織提取物【Eye: Normal Human Retinal Derivatives】

視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體視網(wǎng)膜組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

Redzol（一步法總RNA提取試劑）1mln-Tritriacontan6,18-dione245146

RNasin（RNA酶抑制劑）1,000UBi-linderone12273759

M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶,000Uvibo-Quercitol4886

Fasta-II快速定點突變試劑盒15 rxnSuccinic acid15

Muta-direct™定點突變試劑盒15 rxn6-Deoxy-O-methyl-β-allopyranosyl(1→4)-β-cymaronic acid δ-lactone191313
Duloxetine hydrochloride  136434-34-9  中文名：鹽酸度洛西汀  分子式：C18H20ClNOS    土壤無機0（S-PHOS）含量測試盒   可見分光光度法   50管/24樣

Ritonavir  155213-67-5  中文名：利托那韋  分子式：C37H48N6O5S2    土壤脫氫酶(SDHA)測試盒   可見分光光度法   50管/24樣           

3-O-Acetylandrostenone hydrazone  122914-94-7  中文名：3-O-乙酰基雄酮腙  分子式：C21H32N2O2    土壤纖維素酶（S-CL）試劑盒   可見分光光度法    50管/24樣

Androstenone hydrazone  63015-10-1  中文名：雄酮腙  分子式：C19H30N2O    土壤酸性0酸酶（S-ACP）試劑盒   可見分光光度法   50管/48樣

3,3-Dimethoxy-5α-androstan-17-one  3591-19-3  中文名：3,3-二甲氧基-5α-雄烷-17-酮  分子式：C21H34O3    土壤中性0酸酶（S-NP）試劑盒   可見分光光度法   50管/48樣
去氧穿心蓮內(nèi)酯 HPLC≥98% 5mg Helly固著液50毫升

去氧膽酸 HPLC≥98% 20mg HeneggImmunoglobulinofYolk,IgYELISA試劑盒雞卵黃球蛋白(IgY)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

脫氧膽酸鈉（牛） HPLC≥98% 20mg HepatitisBvirusRFLP基因分析試劑盒20

去氧紫草素 HPLC≥98% 20mg Hexamer(隨機引物)(200納克/微升)100微升

去乙酰車葉草苷酸 HPLC≥98% 20mg HHV6(HUMANHERPESVIRUS6)病毒標準曲線定量PCR擴增檢測試劑盒2

去乙酰華蟾毒精 HPLC≥95% 10mg HHV6-A(HUMANHERPESVIRUS6-A)病毒標準曲線定量PCR擴增檢測試劑盒2

去乙酰基Ophiopojaponin A  5mg HHV6-B(HUMANHERPESVIRUS6-B)病毒標準曲線定量PCR擴增檢測試劑盒2

染料木苷 HPLC≥98% 20mg HHV病毒DNA化試劑盒20

染料木素 HPLC≥98% 20mg HIS(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升

人參二醇 HPLC≥98% 20mg HISTONEH3蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25
人體視網(wǎng)膜組織提取物兔血清總補體(CH50)ELISAKit     Adrenosterone  382-45-6  中文名：腎上腺甾酮  分子式：C19H24O3 

兔血清淀粉樣蛋白Aelisa試劑盒   兔血清淀粉樣蛋白A試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔血清淀粉樣蛋白A試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔血清淀粉樣蛋白A試劑盒、兔血清淀粉樣蛋白A elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     7-Acetoxy-4-methylcoumarin  中文名：7-乙酰氧基-4-甲基香豆素  分子式：C12H10O4 

兔血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISAKit     5,6-Dimethyl-2-Benzothiazolamine  29927-08-0  中文名：5,6-二甲基-2-苯并噻唑胺  分子式：C9H10N2S 

兔血清(NO)ELISA試劑盒     5'-Deoxy-5-fluorocytidine  中文名：  分子式：C9H12FN3O4  度：99.0%

兔血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體1   英文名稱：   Rabbit Lctin like oxLDL Receptor 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LOX-1  5'-Deoxy-5-fluorocytidine  66335-38-4  中文名：  分子式：C9H12FN3O4  度：99.0%

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。