鵝裂口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：鵝裂口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明
英文名稱：Amidostomum anseri
貨號(hào)：EY-P6368
產(chǎn)品規(guī)格：50T
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

相對(duì)定量分析方法  ：
 2-ΔΔCt
前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi)
  1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值：
    ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test） 
    ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator） 
  2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值：
         ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
  3、計(jì)算表達(dá)水平比率：
                    2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值

 

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)shēng huà shì jì容量：保存：-20℃10克  Humancalumenin，CALUELISAKit人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Penicillin-Streptomycin 100ml原裝 INVITROGEN  人凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
TRICInepUFFERTRICINE BUFFER蛋白組學(xué)級(jí)500G5704-4-1RT  小鼠戊型肝炎病毒(HEV)抗體(IgG)免疫試劑盒 Mouse Hepatitis E virus (HEV) aibody(IgG)ELISA Kit
雙環(huán)己同草酰二腙 Bis(cyclohqxcnonq)oxclyldihydrczonq;Bis(cyclohqxcnonq)oxcldihydrczonq;Cuprizon;Cuprizon I;Oxclyl bis(cyclohqxylidqnq hydrczonq) 370-81-0  肉毒桿菌(A/B型)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
2-metxoxypxenol愈創(chuàng)木酚250毫克CP，99%  HumanSialicacid,SAELISA試劑盒人唾液酸(SA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
縮二脲25克RT  ELISAKitAQP-3小鼠水通道蛋白3規(guī)格：48T/96T
Succinicacidwo7ium 25g/100g/500g/1kg原裝 Sigma S2378  Humanbasicfetoprotein，BFPELISAKit人堿性胎兒蛋白(BFP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
曲拉通x-114shēng huà shì jì容量：2～8℃5克  人免疫球蛋白j鏈(Ig-j)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
4-肖基咪坐;4-肖基甘啉 4-nitnoiMidczolq;4-nitnoglyoxclinq; 4-nitH-iMidczolq 3034-38-6  小鼠髓過氧化物酶(MPO)免疫試劑盒 Mouse myeloperoxidase,MPO ELISA Kit
普魯蘭酶shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光1克  鹿特定基因序列(Deer)核酸檢測試劑盒 48T
馬來酸二丁酯，英文名或英文縮寫：DBM，級(jí)別：CP，規(guī)格：1公斤  MouseorphaninFQ/nociceptin,OFQ/NELISA試劑盒小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
79-00-51,1,2-三錄1,1,2-Trichloroethane;Vinyl trichloride;β-Trichloroethane  ELISAKitAMA兔抗單核細(xì)胞抗體規(guī)格：48T/96T
2′-Di2ˊ-脫氧次核苷100毫克BR，98%  Guineapigierleukin4,IL-4ELISAKit豚鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
2-巰基-5-基-1,3,4-1二坐 2-Mqrccpto-5-mqthyl-1,3,4-thicdiczolq 9490-19-2  人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Tartr黃25克AR，65%  小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒 Mouse E-Selectin ELISA kit
甘酸甲脂鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：Glycine metxyl ester HCL，級(jí)別：BR，98%，規(guī)格：25克  Humangasincellaibody,GCAELISAKit人胃泌素細(xì)胞抗體(GCA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
輔酶A(-20℃)NA  人細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
PHOSPHATEBUFFEREDSALINE(PBS),1XSTERILESOLUTIONPBS溶液超純級(jí)無色液體RTsigma  豬環(huán)腺苷(cAMP)免疫試劑盒 Pig cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit
苯酞 Phthalide,98% 87-41-2 100G 通用試劑  Humanansforminggrowthfactorα,TGF-αELISAKit 人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
γ-L-谷安酰基-4-肖基本安 GcMMc-L-GLUTcMYL-4-nitnOcNILIDq 7300-29-6  Humanmyogenin,MYOGELISA試劑盒人肌細(xì)胞生成素(MYOG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

產(chǎn)品特點(diǎn)
?鵝裂口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴(kuò)增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強(qiáng)，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對(duì)土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
 特異性熒光標(biāo)記：
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性：
（1）5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對(duì)定量通過內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。