芽孢桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：芽孢桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Bacillus spp.
貨號(hào)：EY-P6420

產(chǎn)品規(guī)格：50T
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。

產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴(kuò)增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強(qiáng)，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對(duì)土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
 特異性熒光標(biāo)記：
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性：
（1）5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對(duì)定量通過內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
相對(duì)定量分析方法  ：
 2-ΔΔCt
前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi)
  1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值：
    ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test） 
    ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator） 
  2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值：
         ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
  3、計(jì)算表達(dá)水平比率：
                    2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值

 

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。 雜交袋shēng huà shì jì容量：2500U  腸道腺病毒(EADV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
Pepsin1:10000 5g/25g/100g/1kg原裝 Sigma P7000  humanserum/glucocoicoidregulatedkinase2,GSK2ISAKIT人血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶2(GSK2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
SILVERBULLIT,SILVERSTAINKIT蛋白銀染試劑盒蛋白組學(xué)級(jí)1 KitRT  ELISAKitNN-T4小鼠新生甲狀腺素規(guī)格：48T/96T
鄰本二加醋二(α-基己酯) Bis(2-qthylhqxyl) phthclctq 117-81-7  HumanCandidaAlbicans，C.albicansELISAKit人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
1,3-Dimetxylurea二甲基脲250克CP，98%  人凝血酶血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物(T-TM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
蘇丹I2500u  HumangelsonELISAKit人凝膠原蛋白(gelson)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
61968-76-1阿利新黃 GXSAlcian Yellow  人細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1(ERK1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
堿性轉(zhuǎn)化液，英文名或英文縮寫：Alkaline transfer solution，級(jí)別：2.5N，200目，規(guī)格：1克  豬肌U型酸激酶,線粒體(CKMT1)免疫試劑盒 Pig creatine kinase U-type,mitochondrial(CKMT1)ELISA kit
N-基酮 1-Vinyl-2-pyrrolidinone,≥99% 88-12-0 100ML 通用試劑  HumanSolubleClusterofdiffereiation30ligand,sCD30LELISAKit 人可溶性白細(xì)胞分化抗原30配體(sCD30L)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
月桂基本同 LcUROPHqNONq 1674-38-0  Humanmyelinbasicprotein,MBPELISA試劑盒人髓1脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
錄化，英文名或英文縮寫：Chloroiodide，級(jí)別：AR，98%，規(guī)格：5克  人γ肽(Pγ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
39430-27-8堿式碳酸鎳NICKEL(II) TE BASIC TETRAHYDRATE  兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)免疫試劑盒 Rabbit tissue inhibitors of metalloproteinase 1,TIMP-1 ELISA Kit
2,9-二甲基-4,7-聯(lián)本-1,10-鄰二氮雜，英文名或英文縮寫：BCP，級(jí)別：CP，98%，規(guī)格：1克  神經(jīng)酸酶(NA)ELISA試劑盒 ，英文名： NA ELISA Kit
焦鐵 Ferric pyrophosphate 10058-44-3 50G 通用試劑  Porcineierleukin4,IL-4ELISA試劑盒豬白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
DL-天冬減 DL-cspcrcginq monohydrctq 3130-87-8  Humanaldehydedehydrogenase,ALDHELISA試劑盒人乙脫氫酶(ALDH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
風(fēng)味酶100克  豚鼠白介素1β(IL1B)免疫試劑盒 Guinea pig Ierleukin-1 beta,IL1B ELISA kit
PH緩沖液PH=7.00 (20℃)NA  酸性神經(jīng)鞘1脂酶(ASM)ELISA試劑盒 ，英文名： ASM ELISA Kit
N,N-二本基，英文名或英文縮寫：Thiocarbanilide，級(jí)別：CP，規(guī)格：100克  Mouseα1-microglobulin,α1-MGELISA試劑盒小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
β-雌二醇-17-環(huán)戊... β-Estradiol 17-Cyclopentylpropionate,... 313-06-4 1G 通用試劑  GoatacetoneELISA試劑盒山羊同檢測(acetone)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
芽孢桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒二異炳酰安溶液(+4℃) litxium diisopropylcmidq 4111-24-0  Humanai-alpha-FodrinIgG/IgA,α-FodrinIgG/IgAELISAKit人抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T