PrimaCell™小鼠子宮頸上皮細胞試劑盒培養

PrimaCell™小鼠子宮頸上皮細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

Mouse15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISA試劑盒小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒規格：96T/48T  34420-19-4千金子二萜醇  Lathyrol

小鼠中性粒細胞彈性蛋白酶(ELA2)ELISA試劑盒 ，英文名： ELA2 ELISA Kit  88206-46-6羌活醇說明書  Notopterol 

犬球蛋白E(IgE)ELISA檢測試劑盒CanineImmunoglobulinE,IgEELISAKit 96T/48T  78281-02-4羥基紅花黃色素A品牌  Hydroxysafflor yellow A

犬軟骨寡聚基質蛋白(COMP)試劑盒 Dog cailage oligomeric maix protein,COMP ELISA kit  34540-22-2羥基積雪草苷規格  Madecassoside 

英文名稱HumanFree-T4ELISAKit人游離甲狀腺素(Free-T4)規格：96T/48T  18449-41-7羥基積雪草酸  Madecassic acid
484-12-8蛇床子素   Osthole  植物葡萄糖6-1酸異構酶(glucose-6-phosphateisomerase;GPI)電泳分析試劑盒5

483-90-9毛兩面針素規格  Toddalolactone  植物尿苷二1酸葡萄糖焦1酸化酶(UDPglucosepyrophosphorylase)活性比色法定量檢測試劑盒20

483-15-8二氫小檗堿  Dihydroberberine   植物內質網粗提分離試劑盒10

482-89-3靛藍  Indigo   植物膜性囊泡(RSOV和IOV)制備試劑盒20

482-83-7黃檀素說明書  6-Hydroxy-7-methoxy-4-phenylcoumarin    植物彌散吲哚-3-乙酸(IAA)比色法定量檢測試劑盒(包括萃取)20
犬胰島素(INS)試劑盒 Dog Insulin,INS ELISA Kit  38642-49-8苯甲酰芍藥苷規格  benzoylpaeoniflorin

英文名稱Mouse8-iso-ProstaglandinF2a小鼠8-異前列腺素F2α規格：96T/48T  466-24-0苯甲酰烏頭原堿  Benzoylaconitine

部分蛋白酶切多肽譜分析試劑盒10  63238-66-4苯甲酰烏頭原堿說明書  Benzoylhypacoitine

RatFollistatin,FSELISA試劑盒大鼠卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒規格：96T/48T  63238-67-5苯甲酰新烏頭原堿品牌  Benzoylmesaconine

小鼠組酸豐富糖蛋白(HRG)ELISA試劑盒 ，英文名： HRG ELISA Kit  485-49-4比枯枯靈規格  (+)-Bicuculline
PrimaCell™小鼠子宮頸上皮細胞試劑盒培養465-16-7歐夾竹桃苷品牌  Oleandrin   藻類菌脂質綠色熒光染色試劑盒20

465-11-2日蟾蜍他靈規格  Gamabufotalin  棗椰樹(datepalm)培養基500毫升溶液/片劑

464-92-6積雪草酸  Asiatic acid   載玻片細胞組蛋白熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

464-74-4沙蟾毒精  Arenobufagin   載玻片細胞組蛋白NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20

463-40-1α-亞麻酸規格  α-Linolenic acid    載玻片細胞組蛋白H3-K9甲基化NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20