PrimaCell™人肝癌組織源細(xì)胞試劑盒說明書

PrimaCell™人肝癌組織源細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

組蛋白H3-K122(mono)甲基化檢測試劑盒10/20等  162857-78-5遠(yuǎn)志山酮III說明書  Polygalaxanthone III

Mouseangiotensinogen,aGTELISA試劑盒小鼠血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  142998-47-8丹酚酸D品牌  Salvianolic acid D

小鼠硬脂酰輔酶A去飽和酶(SCD)ELISA試劑盒 ，英文名： SCD ELISA Kit  115841-09-3丹酚酸C規(guī)格  Salvianolic acid C

巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA檢測試劑盒RabbitMacrophageInflammatoryProtein-1α,MIP-1αELISAkit 96T/48T  三七皂苷R2(R型)  R-Notoginsenoside R2

犬肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)試劑盒 Canine Creatine Kinase MB isoenzyme,CK-MB ELISA Kit  三七皂苷Ft1說明書  Notoginsenoside Ft1
114590-20-4大豆皂苷Ba說明書  Soyasaponin Ba   英文名稱RatDHEA-S-7ELISAKit大鼠脫氫表雄同-S-7(DHEA-S-7)規(guī)格：96T/48T

114482-86-9木蝴蝶苷B說明書  Oroxin B   英文名稱RatDHEA-S-7ELISAKit大鼠脫氫表雄同-S-7(DHEA-S-7)規(guī)格：96T/48T

114482-86-9木蝴蝶苷B  Oroxin B; Baicalin-7-diglucoside  英文名稱RatDHEAELISAKit大鼠脫氫表雄同(DHEA)規(guī)格：96T/48T

113558-15-9羊藿苷II  Icarisid II   英文名稱RatDHEAELISAKit大鼠脫氫表雄同(DHEA)規(guī)格：96T/48T

1135-24-6阿魏酸品牌  Ferulic acid   英文名稱RatDesminELISAKit大鼠結(jié)蛋白(Desmin)規(guī)格：96T/48T
載玻片細(xì)胞GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  14605-22-2牛磺熊去氧膽酸規(guī)格   Tauroursodeoxycholic acid

Humanβ-lactamaseELISA試劑盒人β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  225937-10-0(+)兒茶素  (+)-Catechin hydrate

小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白(F)ELISA試劑盒 ，英文名： F ELISA Kit  87205-99-0二氫丹參酮Ⅰ說明書  Dihydrotanshinone I

犬血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA檢測試劑盒Caninethrombomodulin,TMELISAKit 96T/48T  76474-56-1二氫姜黃素品牌  DihydrocurcuMin

犬血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒 Dog angiotensin Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA Kit  19408-84-5二氫辣椒堿規(guī)格  Dihydrocapsaicin
PrimaCell™人肝癌組織源細(xì)胞試劑盒說明書光翠雀堿說明書  denudatine   組織尿激酶(UROKINASE)活性熒光定量檢測試劑盒20

二氫青蒿酸規(guī)格  Dihydroartemisinic acid    組織尿激酶(UROKINASE)活性比色法定量檢測試劑盒20

二氫姜黃素  Dihydrocurcumin   組織逆轉(zhuǎn)錄酶(REVERSEANSCREPTASE)活性熒光定量檢測試劑盒20

莪術(shù)烯醇品牌    組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑盒20

冬青素A品牌  Ilexgenin A  組織鎂離子濃度酶反應(yīng)光譜法定量檢測試劑盒20

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。