人小腦組織提取物培養

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人小腦組織提取物 【Human Cerebellum: Normal Cerebellum Derivatives】

小腦位于大腦半球后方，覆蓋在腦橋及延髓之上，橫跨在中腦和延髓之間。它由胚胎早期的菱腦分化而來，小腦通過它與大腦、腦干和脊髓之間豐富的傳入和傳出，參與軀體平衡和肌肉張力（肌緊張）的調節，以及隨意運動的協調。公司科技提供來自新鮮或冷凍人小腦組織中高質量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫院，采集工作根據IRB和HIPAA批準的

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養方法；

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項；

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

Polymyxin B Solution多粘菌素B溶液 mg/m5×1ml 2'-Methylacetanilide16乙酰

PPA –植物組織培養抗菌保護劑ml 2-Methyl-nitrobenzoic acid19751

Propidium Iodide Staining Solution 化丙啶染色液1ml 2-Methyl-(2-methylbenzoylamino)benzoic acid3173748

Proteinase K solution 蛋白酶K mg/ml1ml/ ×1ml 2-Methoxystypandrone851221

Rifampicin solution 利福平溶液5×1ml/×1ml 2-Iodo-oxo-azaandrostane7-carboxylic acid42397
Dregeoside Da1  98665-65-7  中文名：  分子式：C42H70O15    Human thymic somal lymphopoietin (TSLP) ELISA Kit 人胸腺基質細胞生成素(TSLP)ELISA試劑盒

Dehydroadynerigenin digitaloside  52628-62-3  中文名：  分子式：C30H42O8    Humanalveolibasememembranezoneaibody,ABM-AbELISAKit 人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Cardenolide B-1  1318158-89-2  中文名：  分子式：C30H44O8    HumanEerovirusELISA試劑盒人腸病毒(Eerovirus)ELISA試劑盒規格：96T/48T

Drevogenin A  10163-83-4  中文名：  分子式：C28H42O7    組織PKCθ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Dregeoside Ga1  98665-66-8  中文名：  分子式：C49H80O17    Humanparaoxonase,PONELISAKit人酶(PON)ELISA試劑盒規格：96T/48T
去甲基鹽酸左氧氟沙星  Desmethyl Levofloxacin Hydrochloride  質量規格：美國進口 英文名稱RatT3ELISAKit大鼠*狀腺原氨酸(T3)ELISAKit規格：96T/48T

左氧氟沙星  Levofloxacin  質量規格：美國進口 英文名稱RatT4ELISAKit大鼠高敏甲狀腺素(T4)規格：96T/48T

左氧氟沙星-d8  Levofloxacin-d8  質量規格：美國進口 英文名稱RatT4ELISAKit大鼠高敏甲狀腺素(T4)規格：96T/48T

5-羥基氯諾昔康  5-Hydroxy Lornoxicam  質量規格：美國進口 英文名稱RatT4ELISAKit大鼠甲狀腺素(T4)規格：96T/48T

氯諾昔康-d4  Lornoxicam-d4  質量規格：美國進口 英文名稱RatT4ELISAKit大鼠甲狀腺素(T4)規格：96T/48T

N2-洛沙坦-洛沙坦(洛沙坦雜質)  N2-Losartanyl-losartan (Losartan Impurity)  質量規格：美國進口 英文名稱Rattarate-resistaacidphosphataseorm5bELISAKit大鼠抗酸性0酸酶5b(ACP5b)規格：96T/48T

N-三苯甲基洛沙坦(洛沙坦雜質H)  N-Trityl Losartan (Losartan Impurity H)  質量規格：美國進口 英文名稱Rattarate-resistaacidphosphataseorm5bELISAKit大鼠抗酸性0酸酶5b(ACP5b)規格：96T/48T

洛沙坦-d3  Losartan-d3  質量規格：美國進口 英文名稱RatTATELISAKit大鼠凝血酶-抗凝血酶復合物(TAT)規格：96T/48T

羧酸洛沙坦  Losartan Carboxylic Acid  質量規格：美國進口 英文名稱RatTATELISAKit大鼠凝血酶-抗凝血酶復合物(TAT)規格：96T/48T

洛沙坦甲醛  Losartan Carboxaldehyde  質量規格：美國進口 英文名稱RatTestoteroneELISAKit大鼠睪同(Testoterone)ELISAKit規格：96T/48T
人小腦組織提取物培養兔載脂蛋白E(Apo-E)ELISAKit     6-(5-Chloropyridin-2-yl)-7-hydroxy-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin-5-one  43200-81-3  中文名：  分子式：C11H7ClN4O2 

兔載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒     5α-Androstanedione  846-46-8  中文名：5α-雄甾烷二酮  分子式：C19H28O2  度：98.0%  關鍵詞： 

兔載脂蛋白B100(apo-B100)ELISAKit     5α-Androstanedione  中文名：5α-雄甾烷二酮  分子式：C19H28O2  度：98.0%

兔載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒     5α-Androstanedione  846-46-8  中文名：5α-雄甾烷二酮  分子式：C19H28O2 

兔載脂蛋白A1(apo-A1)ELISAKit     6-Chloroguanine riboside  2004/7/1  中文名：6-氯鳥嘌呤核苷  分子式：C10H12ClN5O4

注意事項；

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。