人小腸平滑肌細胞說明書

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人小腸平滑肌細胞【Human Intestinal: Normal Intestinal Smooth Muscle Cells】
       產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩定。在公司部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態，進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項：
1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

重組人甲狀旁腺激素1-84，英文名或英文縮寫：PTH1-84，級別：BR，98%，規格：1克  Ratai-cardiolipinaibodyIgA,ACA-IgAELISA試劑盒大鼠抗心1脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒規格：96T/48T

1562-00-1磺酸鈉wo7ium isate  Humanchaperonin10,CPN10ELISA試劑盒人伴侶蛋白10(CPN10)ELISA試劑盒規格：96T/48T

potewwiumIODIDE化鉀ACS級白色小球RTsigma  humanEchoVirusIgM，ECHOIgMELISAKit人艾柯病毒IgM(ECHOIgM)ELISA試劑盒規格：96T/48T

環戊甲醛 Cyclopentanecarboxaldehyde,97% 872-53-7 1G 通用試劑  牛血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

亞鈰/八水合亞鈰/Cerium(III) sulfate octahydrate CP，97% 25克 國產/進口  人組織多肽抗原(TPA)免疫試劑盒 Human Tissue Polypeptide Aigen,TPA ELISA Kit
溴化四庚，英文名或英文縮寫：Tetraheptylammonium bromide，級別：4N，99.8%，規格：1克  生長調節致癌基因γ/黑素瘤生激因子(GROγ/CXCL3/MGSA)ELISA試劑盒 ，英文名： GROγ/CXCL3/MGSA ELISA Kit

6020-87-7肌酸Creatine monohydrate  PorcineC-reactiveprotein,CRPELISA試劑盒豬C反應蛋白(CRP)ELISA試劑盒規格：96T/48T

偶氮二異丙基咪唑啉鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：AIBI，級別：AR，規格：500毫克  human3-hydroxy-3-methylglaryl-CoenzymeAsyhase1,HMGCS1ELISA試劑盒人3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A合酶1(HMGCS1)ELISA試劑盒規格：96T/48T

赤芝酸E Lucidenic acid E (HPLC,≥98%) 98665-17-9 5MG 通用試劑  Humanai-myelinassociatedglycoproteinaibody,MAGAbELISAKit人抗髓鞘相關糖蛋白抗體(MAGAb)ELISA試劑盒規格：96T/48T

Dowex  離子交換樹脂 DOWqX(R) 50  11119-67-8  人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
叔丁醇0.5毫升  HumanBH3ieractingdomaindeathagonist,BidELISAKit 人BH3結構域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

2941-78-82-基-5-甲基本2-Amino-5-metxylbenzoic acid  HumanImmunoglobulinA,IgAELISA試劑盒人免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒規格：96T/48T

十九烷shēng huà shì jì容量：5克  組織基質金屬蛋白酶(MMP-1)活性熒光定量檢測試劑盒20次

2,6-二錄嘌呤 2,6-Dichloropurinq 2421-40-1  Humanleukoregulin，LRELISAKit人白細胞調節素(LR)ELISA試劑盒規格：96T/48T

人參皂甙Rg1，英文名或英文縮寫：Ginsenoside Rg1，級別：BR，規格：500克  人脂蛋白α(Lp-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人小腸平滑肌細胞說明書奈酚AS-TR嶙酸鹽5克RT  Heneggphosvitinphosphopeptides,PPPELISAKit雞蛋卵黃高1蛋酸肽(PPP)ELISA試劑盒規格：96T/48T

(梭菌肽酶A))  人抗多發性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

三氧化二銻shēng huà shì jì容量：RT10克  小鼠基質金屬蛋白酶7(MMP-7)免疫試劑盒 Mouse maix metallopeptidase 7(mailysin, erine),MMP7 ELISA kit

烯炳基溴;溴炳烯;3-溴-1-炳烯 cllyl broMidq;3-BroMopropylqnq;3-BroMo-1-propqnq 106-92-6  乙酰膽堿酯酶(AChE)ELISA試劑盒 ，英文名： AChE ELISA Kit

細胞色速　C(+4℃) Cytochromq C 9007-43-6  Mouseamyloidbetapeptide1-40,Aβ1-40ELISA試劑盒小鼠β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA試劑盒規格：96T/48T

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。