大鼠子宮平滑肌細胞提取物說明書

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大鼠子宮平滑肌細胞提取物【Rat Uterus: Normal Uterus Derivatives】

大鼠子宮平滑肌細胞提取物是從大鼠原代子宮平滑肌細胞提取的，大鼠原代子宮平滑肌細胞從正常大鼠子宮組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

肺炎克雷伯菌單重熒光PCR檢測試劑盒48Hydroxyprogesterone acetate23醋酸羥孕酮

金黃色葡萄球菌單重熒光PCR檢測試劑盒48Methylprednisolone hemisuccinate29217

金黃色葡萄球菌毒性休克綜合征毒素(TSST) 單重熒光PCR檢測試劑盒48Methylprednisolone acetate536甲基潑尼松龍醋酸酯

金黃色葡萄球菌殺白細胞素(PVL) 單重熒光PCR檢測試劑盒4811β,17α-Dihydroxyα-methylpregna,4-diene,-dione684

金黃色葡萄球菌腸毒素A（SEA）單重熒光PCR檢測試劑盒48Methylprednisolone833甲基潑尼松龍
Gynuramide II  295803-03-1  中文名：  分子式：C42H83NO5  度：97.0%  關鍵詞：  菊三七; 白鵑梅; 神經(jīng)酰胺; 腦苷脂; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒  

Guaiacol glycidyl ether  2210-74-4  中文名：  分子式：C10H12O3  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠絲酸/蘇酸蛋酸酶（STK）ELISA試劑盒  

Griseofulvin  126-07-8  中文名：灰黃霉素  分子式：C17H17ClO6  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA試劑盒           

Gracillin  19083-00-2  中文名：纖細薯蕷皂苷  分子式：C45H72O17  度：98.0%  關鍵詞：  心; 抗腫瘤; 抗真菌; 薯蕷屬; 螺甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠髓過氧化物酶   英文名稱：   Mouse Myeloperoxidase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MPO

Glycoursodeoxycholic acid  64480-66-6  中文名：甘氨熊脫氧膽酸  分子式：C26H43NO5  度：98.5%  關鍵詞：  膽烷; 對照品; 標準品; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠巨噬細胞趨化蛋白-1   英文名稱：   monocyte chemotactic protein 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MCP-1
太子參環(huán)肽B HPLC≥98% 20mg Humanasialoglycoproteieceptor,ASGPRELISAKit 人去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

檀香醇 UV≥98% 20mg HumanAspaateaminoansferase,ASTELISAKit 人天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

桃葉珊瑚苷 HPLC≥98% 20mg HumanAspaateaminoansferase,GOT/GPTELISA試劑盒人天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT/GPT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

特女貞苷 HPLC≥98% 20mg Humanasymmeicaldimethylarginine,ADMAELISA試劑盒人不對稱二甲基精氨酸(ADMA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

藤黃酸 HPLC≥98% 20mg HumanAtaxiatelangiectasiamated,ATMELISA試劑盒人擴張性共濟失調(diào)突變基因(ATM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

惕格酸 HPLC≥98% 20mg HumanATP-bindingcassetteanspoerG2,ABCG2ELISA試劑盒人腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G2(ABCG2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

天麻素 HPLC≥98% 20mg HumanAttacinELISAKit 人抗菌肽(Attacin)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

甜菜堿 HPLC≥98% 20mg humanAzidothymidine,AZTELISAKit 人疊氮胸苷(AZT)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

甜茶苷 HPLC≥98% 20mg Humanbacterialvaginosis,BVELISA試劑盒人細菌(BV)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

甜橙黃酮 HPLC≥98% 20mg Humanbasicfetoprotein,BFPELISA試劑盒人堿性胎兒蛋白(BFP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
大鼠子宮平滑肌細胞提取物說明書人組織因子(TF)ELISA試劑盒     3,6'-Disinapoylsucrose  139891-98-8  中文名：3,6'- 二芥子?；崽?/span>  分子式：C34H42O19  度：98.0%  關鍵詞：  抗抑郁; 遠志; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

人組織型纖維溶酶激活物（t-PA）ELISA試劑盒     3,6'-Disinapoylsucrose  139891-98-8  中文名：3,6'- 二芥子?；崽?/span>  分子式：C34H42O19 

人組織型纖溶酶原激活因子(tPA)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human tPA (Plasminogen Activator, Tissue) ELISA Kit  3,6-Bis(hydroxymethyl)durene  7522-62-5  中文名：3,6-雙(羥甲基)杜烯  分子式：C12H18O2  度：98.0%   

人組織型纖溶酶原激活劑elisa試劑盒   人組織型纖溶酶原激活劑試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人組織型纖溶酶原激活劑試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人組織型纖溶酶原激活劑試劑盒、人組織型纖溶酶原激活劑elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     3-Allylrhodanine  中文名：3-烯丙基羅丹寧  分子式：C6H7NOS2 

人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒     3,6-Bis(hydroxymethyl)durene  中文名：3,6-雙(羥甲基)杜烯  分子式：C12H18O2  度：98.0%

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。