PrimaCell™人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞試劑盒

PrimaCell™人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價，產(chǎn)品貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。

細(xì)胞培養(yǎng)方法；
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項；

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項；

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

鴨白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA檢測試劑盒DuckIerleukin-8,IL-8ELISAKit 96T/48T  174972-80-6巴利森苷C  Parishin C 

犬游離*狀腺原氨酸(Free-T3)試劑盒 Canine Free i-iodothyronine Indes,Free-T3 ELISA Kit  62499-28-9巴利森苷B說明書  Parishin B  

英文名稱MouseBLC-1/CXCL13ELISAKit小鼠B-細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)規(guī)格：96T/48T  62499-28-9巴利森苷A品牌  Coniferin 

冰凍切片組織線粒體膜通道孔(MPTP)熒光檢測試劑盒50  76135-82-5牡荊素葡萄糖苷規(guī)格  Glucosyl-vitexin 

RatFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISA試劑盒大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  51771-49-4氯化纈草素  valechlorine
三七皂苷Ft1說明書  Notoginsenoside Ft1   組織色素含量比色法定量檢測試劑盒20

三七皂苷Ft1  Notoginsenoside Ft1  組織三1酸肌醇(IP3)含量化學(xué)熒光定量檢測試劑盒20

三七皂苷Fc規(guī)格  Notoginsenoside Fc  組織三1酸肌醇(IP3)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒20

肉桂酸說明書  cinnamic acid    組織三1酸肌醇(IP3)含量FR定量檢測試劑盒20

人參皂苷Rk1規(guī)格  Ginsenoside Rk1   組織乳酸脫氫酶(LDH)總活性酶動力比色法定量檢測試劑盒20
Mouse15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISA試劑盒小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  34420-19-4千金子二萜醇  Lathyrol

小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(ELA2)ELISA試劑盒 ，英文名： ELA2 ELISA Kit  88206-46-6羌活醇說明書  Notopterol 

犬球蛋白E(IgE)ELISA檢測試劑盒CanineImmunoglobulinE,IgEELISAKit 96T/48T  78281-02-4羥基紅花黃色素A品牌  Hydroxysafflor yellow A

犬軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)試劑盒 Dog cailage oligomeric maix protein,COMP ELISA kit  34540-22-2羥基積雪草苷規(guī)格  Madecassoside 

英文名稱HumanFree-T4ELISAKit人游離甲狀腺素(Free-T4)規(guī)格：96T/48T  18449-41-7羥基積雪草酸  Madecassic acid
PrimaCell™人肺大靜脈平滑肌細(xì)胞試劑盒說明書106577-39-3HederacolchisideA1  Hederacolchiside A1   英文名稱RatCoisolELISAKit大鼠皮質(zhì)醇(Coisol)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

1063-77-0諾米林品牌  Nomilin   英文名稱RatCoicoseroneELISAKit大鼠皮質(zhì)同(Coicoserone)規(guī)格：96T/48T

10605-02-4鹽酸巴馬汀品牌  Palmatine   英文名稱RatCoicoseroneELISAKit大鼠皮質(zhì)同(Coicoserone)規(guī)格：96T/48T

10597-60-1羥基酪醇品牌  Hydroxytyrosol   英文名稱RatCINC-3ELISAKit大鼠CINC-3規(guī)格：96T/48T

105558-26-7人參皂苷Rh3規(guī)格  Ginsenoside Rh3  英文名稱RatCINC-2a/bELISAKit大鼠CINC-2a/b規(guī)格：96T/48T