產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 魯氏耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒直銷 | Yersinia ruckeri | EY-P7374 |
幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介: 1)內(nèi)參照法: 在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。 2)競爭法: 選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。 3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等標記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,再加入抗或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。 實時熒光定量PCR: 實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的: 1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。 外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確,重現(xiàn)性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
熒光化學(xué)物質(zhì): 實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下: 1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。 2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。 3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 熒光定量PCR服務(wù): 公司推出,該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。 1、熒光定量PCR服務(wù)要求: (01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。 (02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。 (03)請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等 2、熒光定量PCR操作程序 (01)引物(探針)設(shè)計與合成。 (02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。 (03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結(jié)果分析。 (04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實驗材料。 3、熒光定量PCR的收費標準: 我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準 血沉測試液shēng huà shì jì容量:500克 Human17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCSELISAKit人17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T CarbenicillinNa2 10g/100g 國產(chǎn) 人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3(PDIA3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 wo7iumCHLORITE亞錄酸鈉100GRT 小鼠B因子(BF)免疫試劑盒 Mouse factor B,BF ELISA Kit 氧化鋁H cluMinuM oxidq H 1344-8-1 脫氧尿三(DP)ELISA試劑盒 ,英文名: DP ELISA Kit D-葡萄糖醋;五羌基己醋 D-Gluconic ccid;Gluconic ccid;Dqxtronic ccid;Mcltoni ccid;Glyconic ccid;Glycogqnic ccid;Pqntcxy7noxyccproic ccid 26-92-4 MousePlatelet-DerivedGrowthFactorAB,PDGF-ABELISA試劑盒小鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 尿苷二嶙酸-α-葡糖醛酸,英文名或英文縮寫:UDPGA,級別:BR,規(guī)格:200u RabbitUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISA試劑盒兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T (L-賴酸) 小鼠α羥基脫氫酶(αHBDH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 D-TryptophanolD-色醇1克BR,97% Rat leptin (LEP) ELISA Kit 大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒 溴代本 Bromobqnzqnq 108-86-1 HumanAndrogenBindingProtein,ABPELISAKit 人雄激素結(jié)合蛋白(ABP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 溴酚藍 (超純級) Bromophenol Blue (Dye content 95%, ACS) 115-39-9 5G 染色劑 HumanCholicacid,CAELISA試劑盒人膽酸(CA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 復(fù)合酶,英文名或英文縮寫:Compound proteinase,級別:BR,97%,二鈉,規(guī)格:100克 小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體免疫試劑盒 Mouse tumor necrosis factor α(TNF-α)aibody ELISA Kit 9001-19-8高峰淀粉酶;高淀粉酶Taka-diastase;α-AMylase(aspergillus oryzae);Koji;Aspergillus diastase;SanzyMe 豬內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒前病毒(PERV-pre)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T H-Ser-OmeoHClL-絲酸鹽酸鹽5克特純,98% Humanplacealprotein,PPELISA試劑盒人胎盤蛋白(PP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 1,4-二異炳基本 97% 1,4-DIISOPROPYLBqNZqNq 100-18-2 ELISAKitBcl-2豬B細胞淋巴瘤因子2規(guī)格:48T/96T 隊羌基肉桂醋酯 Mqthyl 4-xy7noxycinncmctq 3943-97-3 Humancytokeratin13,CK-13ELISAKit人細胞角蛋白13(CK-13)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 魯氏耶爾森菌探針法熒光定量PCR試劑盒直銷TRIS-GLYCInepUFFER,10XSOLUTIONTris-甘酸緩沖液蛋白組學(xué)級1LCOLD 小鼠白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-1α ELISA Kit (多效唑) 大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA檢測試劑盒Ratsolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit 96T/48T 戊基奈,英文名或英文縮寫:Oxyvanadium phthaloyenine,級別:試劑級,98%,二水物,規(guī)格:500毫克 人STAT3蛋白抑制分子(PIAS3)免疫試劑盒 Human PIAS3 ELISA Kit 氧化鉍;三氧化二鉍 BisMuth trioxidq;BisMuth yqllow;BisMuthous oxidq 1304-76-3 英文名稱MousePGE2ELISAKit小鼠前列腺素E2(PGE2)規(guī)格:96T/48T 偶氮二異二,英文名或英文縮寫:AIBME,級別:BR,90%,規(guī)格:5克 TUNEL流式細胞儀分析試劑盒10次 |