人成骨細(xì)胞提取物培養(yǎng)

人成骨細(xì)胞提取物【Human Bone: Normal Osteoblast Derivatives】

人成骨細(xì)胞提取物是從人原代成骨細(xì)胞提取的，人原代成骨細(xì)胞從正常人成骨組織制備。正常人成骨組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。

豬繁殖與呼吸綜合征病毒歐洲株抗體ELISA檢測試劑盒96/192/4Rifampicin132926利福平

豬圓環(huán)病毒2型抗體ELISA檢測試劑盒           96Ribavirin367914利巴韋林

口蹄疫病毒NS抗體單抗阻斷ELISA試劑盒96/192/4Rhein4783大黃酸

牛口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體膠體金檢測試劑盒Retigabine18122瑞替加濱

牛結(jié)核γ-干擾素ELISA檢測試劑盒/1Resibufogenin4659脂蟾毒配基
Perforatumone  827319-50-6  中文名：  分子式：C35H52O5  度：%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠心素   英文名稱：   aialnaiureticpeptide   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ANP

Pentoxyverine   23142-01-0  中文名：枸櫞酸噴托維林  分子式：C26H39NO10  度：98.0%      小鼠凋亡誘導(dǎo)因子   英文名稱：   apoptosis-inducing factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AIF

Pentagalloylglucose  14937-32-7  中文名：五沒食子酰葡萄糖  分子式：C41H32O26  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISAKit  

Pemetrexed di  357166-30-4  中文名：培美曲塞二鈉  分子式：C21H23N5Na2O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠黑色素細(xì)胞抗體(MCAb)ELISAKit  

Pemetrexed  137281-23-3  中文名：培美曲塞二鈉  分子式：C20H21N5O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠甲狀腺素(T4)ELISAKit
長春西汀 HPLC≥98% 20mg AKT蛋白共沉淀分析試劑盒5

長春新堿 HPLC≥98% 20mg AMCA蛋白標(biāo)記試劑盒3(200微克/)

長春質(zhì)堿 HPLC≥98% 20mg AMPKELISA試劑盒魚0酸化腺苷酸活化蛋白激酶規(guī)格：96T/48T

長梗秦艽酮 HPLC≥98% 20mg ANDROGEECEPTOR蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25

常春藤苷C HPLC≥98% 20mg ANDROGEECEPTOR蛋白共沉淀分析試劑盒5

常春藤苷D HPLC≥98% 20mg AnnexinV(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克

常春藤苷H HPLC≥98% 5mg ANNEXINV-FITC標(biāo)記法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒10/20

常春藤皂苷B HPLC≥98% 20mg APATHY封片液10毫升

常春藤皂苷元 HPLC≥98% 20mg APC(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微克

常春藤皂苷元OβD葡萄糖酯苷 HPLC≥98% 20mg APC蛋白標(biāo)記試劑盒1(1毫克/)
人成骨細(xì)胞提取物培養(yǎng)Sprengerinin A  中文名：  分子式：C38H60O12    植物25羥基維生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA試劑盒  

Spongouridine  中文名：阿糖尿苷  分子式：C9H12N2O6    魚脫酶3（DIO3）ELISA檢測試劑盒   96T/48T   ELISA   組裝/原裝

Soyacerebroside II  中文名：大豆腦苷II  分子式：C40H75NO9    魚脫酶2（DIO2）ELISA檢測試劑盒   96T/48T   ELISA   組裝/原裝        

Soyacerebroside I  中文名：  分子式：C40H75NO9    植物鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒  

Sorafenib tosylate  中文名：索拉非尼  分子式：C28H24ClF3N4O6S    植物鈣調(diào)0酸酶（CaN）ELISA試劑盒

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。