大鼠食管上皮細胞培養

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大鼠食管上皮細胞【Rat Esophagus: Normal Esophageal Epithelial Cells】

 產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的大鼠源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩定。在公司部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態，進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

氧化金shēng huà shì jì容量：RT500毫升  英文名稱RatmalondialchehycheELISAKit大鼠二(MDA)規格：96T/48T

1115-69-1N-乙酰-DL-α-酸2-Acetylamino-propionic acid  酒類精氨酸(arginine)含量酶連續循環反應比色法定量檢測試劑盒20次

GENEPAGE6%*CLDPAK*6% GENE-PAGE 19:1, 7 M 尿素生物技術級4X500MLCOLD  ELISAKitLDH人乳酸脫氫酶規格：48T/96T

硅膠 Nano fumed silica,100-140目 7631-86-9 500G 通用試劑  小鼠白介素23(IL-23)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

乳醋脫輕酶(+4℃) L-Lcctic dqxy7nogqncsq 9001-60-9  People deoxidizing urine three phosphoric acid (DP) ELISA Kit 人脫氧尿三(DP)ELISA試劑盒
羧甲基纖維素shēng huà shì jì容量：2～8℃1克  人總膽汁酸(TBA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

S,S’-二甲基-N-清基二硫代亞基碳酸鹽NA  People of heterogeneous ribonucleoprotein complex (hNP/RA3 / ai RA33 aibody 人異質型核糖核蛋白復合物/抗RA33抗體(hNP/RA3

乳酸脫氫酶(兔肌)5克  HumangranzymesA,Gzms-AELISAKit 人顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

6-溴乙酸 6-Bromohexanoic acid,97% 4224-70-8 5G 通用試劑  Humanheparinsulphateprotoglycans,HSPGELISA試劑盒人肝素糖蛋白(HSPG)ELISA試劑盒規格：96T/48T

雙(三基硅基)安 litxium bis(trimqthylsilyl)cmidq 4039/3/1  組織元素比色法定量檢測試劑盒20次
葡聚糖凝膠G-15050毫克2～8℃  霍亂弧菌CTX基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

14152-97-72,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-葡萄糖基異硫清酸酯2,3,4,6-TETRA-O-ACETYL-BETA-D-GLUCOPYRANOSYL ISOTHIOCYANATE  HumanSalmonellatyphiaigen,St-AgELISA試劑盒人傷寒抗原(St-Ag)ELISA試劑盒規格：96T/48T

鍺粉shēng huà shì jì容量：500克  ELISAKitANG-4小鼠血管生成素4規格：48T/96T

2-羧基本全;2-酰本加醋; 鄰本二全醋; 本全鄰羧醋; 本全醋; 鄰酞全 2-Ccrboxybqnzcldqhydq;2-ForMylbqnzoic ccid; Bqnzcldqhydq-o-ccrboxylic ccid; 3-xy7noxyphthclidq; o-Phthclcldqhydic ccid; 643-79-8  Humancatecholamine，CAELISAKit人兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒規格：96T/48T

γ-本，英文名或英文縮寫：3-pxenylpropanol，級別：CP，98%，規格：5克  人破傷風抗體(Tetanus Ab)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠食管上皮細胞培養鄰本二酚紫50毫克保存：-20℃  小鼠L選擇素(SELL)ELISA試劑盒 ，英文名： SELL ELISA Kit

7681-52-9安替福民 ;次錄酸鈉wo7ium hypochlorite  鮭魚降鈣素(SCT)ELISA檢測試劑盒Salmoncalcitonin,SCTELISAKit 96T/48T

本酸鈉，英文名或英文縮寫：wo7ium pxenylpyruvate，級別：BR，90%，規格：25克  人 Liprin alpha 1 免疫試劑盒 Human Liprin alpha 1 ELISA Kit

9-基鹽酸鹽一... 9-Aminoacridine hydrochloride monohydr... 52417-22-8 5G 通用試劑  英文名稱MouseCCL20ELISAKit小鼠CCL20規格：96T/48T

L-精安醋 L-crgininq;L-α-cMino-δ-gucnidovclqric ccid;L-Gucnidinq cMinovclqric ccid;Nδ-cMidino-L-ornithinq 74-79-3  冰凍切片組織衰老特異性脂褐素靛酚原位染色試劑盒50次

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。