PrimaCell™小鼠腦膜成纖維細胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | PrimaCell™小鼠腦膜成纖維細胞試劑盒 | | EYX99613 |
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產品現貨,超低比價,產品貨期短,價格優,售后齊全。 細胞培養方法; 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。 2、細胞復蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
實驗事項; 1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。 2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內,如標本數量多,推薦使用多道移液器加樣。 3. 孵育:為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發;洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。 4. 洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數。 5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。 6. 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請提前加入終止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。 7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數。 注意事項; 1. 接收到,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。 4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。 Mouse17-Hydroxyprogesterone,17-OHPELISA試劑盒小鼠17羥孕同(17-OHP)ELISA試劑盒規格:96T/48T 103548-82-9石杉堿乙品牌 Huperzine B 小鼠脂解激活脂蛋白受體(LSR)ELISA試劑盒 ,英文名: LSR ELISA Kit 476-28-8石蒜堿規格 Lycorine 犬白細胞分化抗原6(CD6)ELISA檢測試劑盒Canineclusterofdiffereiation6,CD6ELISAKit 96T/48T 7084-24-4矢車菊素-3-O-葡萄糖苷 Cyanidin-3-O-glucoside chloride 犬前列腺素F2α(PGF2α)試劑盒 Canine Prostaglandin F2α,PGF2α ELISA Kit 6155-35-7鼠李糖說明書 L-Rhamnose monohydrate 英文名稱HumanacetylcholinereceptoraibodyELISAKit人乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒規格:96T/48T 5957--80-2鼠尾草酚品牌 Carnosol 41060-15-5新補骨脂異黃酮說明書 Neobavaisoflavone 載玻片細胞βRUNX3蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 41059-79-4知母皂苷AⅢ說明書 Timosaponin A-Ⅲ 載玻片細胞βCOLLAGENI蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 40957-83-3黃豆黃素品牌 Glycitein 載玻片細胞βCOLLAGENII蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 404-86-4辣椒堿規格 Capsaicin 載玻片細胞βAMYLOID蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 40437-72-7山柰酚-3-O-葡萄糖鼠李糖苷規格 Kaempeerol-3-Oglucorhamnoside 載玻片細胞βAMYLOID蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 人抗單核細胞抗體(AMA)試劑盒 Human ai-Monocyte aibody,AMA ELISA Kit 27215-14-1新穿心蓮內酯規格 Neoandrographolide RabbitThromboxaneB2,TX-B2ELISAKit兔血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒規格:96T/48T 43043-74-9去氧紫草素 Deoxyshikonin 載玻片細胞CDK3蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 29782-68-1水飛薊寧說明書 Silydianin Humanα-Synuclein,α-SYNELISA試劑盒人α突觸核蛋白(α-SYN)ELISA試劑盒規格:96T/48T 24063-71-6異莪術烯醇品牌 Isocurcumenol 小鼠組織因子通道抑制因子(TFPI)ELISA試劑盒 ,英文名: TFPI ELISA Kit 952068-64-3巴利森苷D規格 Parishin D PrimaCell™小鼠腦膜成纖維細胞試劑盒497-76-7熊果苷 Arbutin 植物細胞色素C釋放凋亡檢測試劑盒10 491-80-5鷹嘴豆芽素A品牌 Biochanin A 植物細胞染色體分離試劑盒20 491-80-5鷹嘴豆芽素A Biochanin A 植物細胞內氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒50 491-70-3木犀草素品牌 Luteolin 植物細胞可溶性總核蛋白粗提制備試劑盒20 491-67-8黃芩素規格 Baicalein 植物細胞壁束縛酸性蔗糖轉化酶(acidinvease)活性比色法定量檢測試劑盒(胞壁)20 |