產品名稱 | PrimaCell™人直腸平滑肌細胞試劑盒價格 | 英文名稱 | | 貨號 | EYX99497 |
PrimaCell™人直腸平滑肌細胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
實驗要點及說明; 1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作要點; 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。 5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。 6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。 鴨病毒性腸炎病毒(DEV)ELISA檢測試劑盒Duckviruseeritis,DEVELISAKit 96T/48T 98665-22-6靈芝酸G品牌 Ganoderic acid G 犬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)試劑盒 Canine acetylcholine receptor aibody,AChRab ELISA Kit 98296-48-1靈芝酸C2規(guī)格 Ganoderic acid C2 英文名稱MouseAβ1-42proteinELISAKit小鼠Aβ1-42蛋白規(guī)格:96T/48T 108340-60-9靈芝酸D Ganoderic acid D 冰凍組織固著液50毫升 74285-86-2雷酚內酯說明書 Triptophenolide Ratferritin,FEELISA試劑盒大鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 74285-86-2雷酚內酯品牌 Triptophenolide 林澤蘭內酯B規(guī)格 Eupalinilide B 組織牛病毒性腹瀉病毒(BovineViralDiarrhoeaVirus;BVDV)定性試劑盒20 苦玄參苷ⅠB說明書 Piefeltarraenin ⅠB 組織牛病毒性腹瀉病毒(BovineViralDiarrhoeaVirus;BVDV)定量PCR擴增檢測試劑盒20 金色酰胺醇酯 Aurantiamide acetate 組織凝血酶/活化凝血因子II(THROMBIN/FACTORIIa)活性熒光定量檢測試劑盒20 絞股藍皂苷XLIX規(guī)格 Gypenoside XLIX 組織凝血酶/活化凝血因子II(THROMBIN/FACTORIIa)活性比色法定量檢測試劑盒20 甲基麥冬黃酮B說明書 Methylophiopogonone B 組織檸檬酸合成酶活性比色法定量檢測試劑盒20 MouseAngiotensinconveingenzyme,ACEELISA試劑盒小鼠血管緊張素轉化酶(ACE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 36948-76-2千層紙素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷 Oroxyloside 小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒 ,英文名: Hp-IgG ELISA Kit 114482-86-9木蝴蝶苷B說明書 Oroxin B 小鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA檢測試劑盒MousePulmonarysurfatca-associatedproteinA,SP-AELISAKit 96T/48T 木蝴蝶苷A品牌 Oroxin A 人結核菌素(Tuberculin)試劑盒 Human Tuberculin ELISA Kit 絞股藍皂苷XLIX規(guī)格 Gypenoside XLIX Ratai-endothelialcellaibody,AECAELISAKit大鼠抗內皮細胞抗體(AECA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去芹菜糖桔梗皂苷D Deapio platycodin D PrimaCell™人直腸平滑肌細胞試劑盒價格113443-70-2大黃酸-8-O-β-D-葡萄糖苷品牌 Rhein-8-O-β-D-glucopyranoside 英文名稱RatDesminELISAKit大鼠結蛋白(Desmin)規(guī)格:96T/48T 113443-70-2大黃酸-8-O-β-D-葡萄糖苷品牌 Rhein-8-O-β-D-glucopyranoside 英文名稱RatCytochromoP450ELISAKIT大鼠細胞色素P450規(guī)格:96T/48T 113146-74-0酸漿苦味素L規(guī)格 Physalin L 英文名稱RatCytochromeCELISAKit大鼠細胞色素C(CytochromeC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 1126032-65-2異-羅漢果皂苷V品牌 isomogroside V 英文名稱RatCytochromeCELISAKit大鼠細胞色素C(CytochromeC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 1124-11-4川芎嗪 Chuanxiongzine 英文名稱RatCystatinCELISAKit大鼠胱抑素C(CysC)規(guī)格:96T/48T 運輸和保存; 視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。 1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。 2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。 |