產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 腸球菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明 | Enterococcus spp. | EY-P6668 |
實(shí)時(shí)熒光定量PCR: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的: 1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性*,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。 2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。 外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確,重現(xiàn)性的定量方法,已得到*的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。 熒光化學(xué)物質(zhì): 實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料?,F(xiàn)將其原理簡述如下: 1. TaqMan熒光探針:PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺。 2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。 3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補(bǔ)配對,導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近,不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
熒光定量PCR服務(wù): 公司推出,該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗(yàn)證基因芯片,siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。 1、熒光定量PCR服務(wù)要求: (01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。 (02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。 (03)請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等 2、熒光定量PCR操作程序 (01)引物(探針)設(shè)計(jì)與合成。 (02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。 (03)進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。 (04)實(shí)驗(yàn)完成后,提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實(shí)驗(yàn)材料。 3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn): 我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。 鹽酸黃,英文名或英文縮寫:Acriflavine xy7nochloride,級別:BR,99%,規(guī)格:25克 HumanLegionellaaibodyIgG,LPAb-IgGELISAKit人軍團(tuán)菌抗體IgG(LPAb-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 硅酯 H-295NA 人載脂蛋白A4(apo-A4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 環(huán)扶哌酸,英文名或英文縮寫:Ciprofloxacin,級別:BR,20u/mg,規(guī)格:25克 Rat major histocompatibility complex class II (MHC II /AgB /H-1 II) ELISA Kit 大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/AgBⅡ/H-1Ⅱ)ELISA試劑盒 日當(dāng)藥黃素 Swertiajaponin (HPLC,≥98%) 6980-25-2 20MG 標(biāo)準(zhǔn)品 HumaumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TSGFELISAKit 人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子(TSGF)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 醋醋拂輕1 Fludrocortisonq ccqtctq 214-36-3 HumanInsulieceptorβ,ISR-βELISA試劑盒人胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 球蛋白抗原豚鼠IgGshēng huà shì jì容量:500克 HumanAngiopoietin1,ANG-1ELISA試劑盒人血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 9036-06-0鏈霉菌蛋白酶(-20℃)EC 3.4.24.4 HumanAspaateaminoansferase,GOT/GPTELISAKit人天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT/GPT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 溴化shēng huà shì jì容量:25克 人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 4-基二苯醚 4-Phenoxyaniline,97% 139-59-3 25G 通用試劑 兔子氧化酶(DAO)免疫試劑盒 Rabbit diamine oxidase,DAO ELISA Kit 二本基鱗醋 Diphqnylphosphinic ccid 1707-03-2 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA試劑盒 ,英文名: COMP ELISA Kit 精酸葡萄糖斜面瓊脂100毫升2~8℃ RabbitGlucosedependeinsulieleasingpolypeptide,GIPELISA試劑盒兔子葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 鷹爪豆堿(+4℃)(-)-Sparteine sulfate pentahydrate Humanai-Nogo-Aaibody,NOGO-AAbELISA試劑盒人NOGO-A抗體(Nogo-AAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 曲拉通x-1001毫升 HumancathepsinD,cath-DELISAKit人組織蛋白酶D(cath-D)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 乙二醇苯醚 2-Phenoxyethanol,99% 122-99-6 500G 通用試劑 人EB病毒IgA(EBv IgA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 培養(yǎng)皿刷/Petri dish brush ¢60mm 10支/把 國產(chǎn)/進(jìn)口 兔信號肽,CUB域,EGF樣1(SCUBE1)免疫試劑盒 Rabbit signal peptide,CUB domain,EGF-like 1,SCUBE1 ELISA kit 腸球菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明赤蘚糖醇100克 humanADAMmetallopeptidasewiththrombospondiype1motif4,ADAMTS4ELISAKit人ADAM金屬肽酶含血小板反應(yīng)蛋白1基元4(ADAMTS4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 13781-67-42-(3-1吩基)乙醇Thiopxene-3-ethanol 人抗巨細(xì)胞病毒抗體IgG(ai-CMV IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 布拉德福試劑,英文名或英文縮寫:Bradford Reagent,級別:GR,98%,規(guī)格:10克 小鼠巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)免疫試劑盒 Mouse Macrophage Migration Inhibitory Factor,MIF ELISA Kit 2-錄本酚 2-Chlorophqnol 92-27-8 游離肉堿(Free Carnitine)ELISA試劑盒 ,英文名: Free Carnitine ELISA Kit 琥珀酰亞,英文名或英文縮寫:Succinimide,級別:高純,98%,規(guī)格:25毫克 MacrobrachiumrosenbergiiNodavirus,MrNVELISA試劑盒羅氏沼蝦諾達(dá)病毒(MrNV)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介: 1)內(nèi)參照法: 在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。 2)競爭法: 選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。 3)PCR-ELISA法: 利用或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。 |