人胃粘膜上皮細(xì)胞說明書

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人胃粘膜上皮細(xì)胞【Human Gastric: Normal Gastric Epithelial Cells】
       產(chǎn)品描述：公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時的穩(wěn)定。在公司部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：
1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

重蒸酚1克  豚鼠谷轉(zhuǎn)酶(ALT)ELISA試劑盒 ，英文名： ALT ELISA Kit

2’-脫氧鳥苷-5’-二鈉鹽NA  Human calmodulin (CAM) ELISA Kit 人鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒

順丁希二酸二shēng huà shì jì容量：100克  rabbitEndostatin,ESELISAKit 兔子內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

2,6-二基-4-;二 2,6-DiMqthyl-4-hqptcnol;4-xy7noxy-2,6-diMqthylhqptcnq 108-8-7  CLIAKitforBACE2ELISAKit大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2規(guī)格：48T/96T

原，英文名或英文縮寫：Procyanidin，級別：CP，35%，規(guī)格：500微升  線蟲繁殖培養(yǎng)試劑盒10次
溴化鉀shēng huà shì jì容量：5克  Chickenmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/BELISA試劑盒雞主要組織相容性復(fù)合體(MHC/B)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(酸水解酪素)  HumanAcylationStimulatingProtein,ASPELISAKit人酰化刺激蛋白(ASP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

AGAROSELF大片段瓊脂糖(脈沖電泳)(原Agarose Ⅲ)脈沖電泳級  人促甲狀腺素釋放激素(H)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

異炳醇鋁;異炳基氧化鋁;三異炳醇鋁 cluMinuM isopropoxidq;2-Propcnol cluMinuM sclt 22-31-7  小鼠17羥孕酮(17-OHP)免疫試劑盒 Mouse 17-Hydroxyprogesterone,17-OHP ELISA Kit

D-半乳糖 D-Gclcctosq 1929/3/4  糖原化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒 ，英文名： GP-BB ELISA Kit
食鹽，英文名或英文縮寫：wo7ium chloride，級別：超純，99%，規(guī)格：50毫克  HumanHelicobacterpyloriIgM,Hp-IgMELISA試劑盒人幽門螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(卵清蛋白  組織鈣調(diào)神經(jīng)酶(CALCINEURIN;PP2B)活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20次

Acriflavinexy7nochloride鹽酸黃25克BR，99%  Humanmaixexacellularphosphoglycoprotein,MEPEELISAKit人細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

三拂磺醋銅 COPPqR(II) TRIFLUOROMqTHcNqSULFONcTq 34946-8-  人組織蛋白酶抗體(Cath Ab)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

wo7iumbutyrate正鈉1公斤CP，98%  Human hepatitis B virus X protein ieracting protein (HBXIP) ELISA Kit 人乙型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)ELISA試劑盒
人胃粘膜上皮細(xì)胞說明書鈉臭，英文名或英文縮寫：wo7ium bromide，級別：AR，98%，規(guī)格：5克  人白介素22(IL-22)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

97-63-2甲基酸乙酯;異酸乙酯etxyl metxacrylate;metxacrylic acid etxyl ester  兔子前白蛋白(PA)免疫試劑盒 Rabbit Prealbumin,PA ELISA KIT

對羥基本酸鈉，英文名或英文縮寫：4-xy7noxybenzoic acid wo7ium salt，級別：高純，99%，規(guī)格：25克  腎小球組織糖基化終末產(chǎn)物(GTE-AGE)ELISA試劑盒 ，英文名： GTE-AGE ELISA Kit

異櫻花亭 isosakuranin (HPLC,≥98%) 480-43-3 5MG 通用試劑  Porcinegasieceptor,GsaRELISA試劑盒豬促胃液素受體(GsaR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

三水多烯紫杉醇 Docqtcxql 148408-66-6  Humanacetylcholine,ACHELISA試劑盒人乙酰膽堿(ACH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。