人主動脈內(nèi)皮細胞提取物培養(yǎng)

人主動脈內(nèi)皮細胞提取物【Human Aorta: Normal Aortic Endothelial Cell Derivatives】

人主動脈內(nèi)皮細胞提取物是從人原代主動脈內(nèi)皮細胞提取的，人原代主動脈內(nèi)皮細胞從正常人主動脈內(nèi)皮組織制備。正常人主動脈內(nèi)皮組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

植物組培盒 方形8-Anilino-naphthalenesulfonic acid8268-苯胺-萘磺酸

棕色玻璃瓶p-Anisic acid09對茴香酸

黃曲霉毒素M1快速檢測卡（膠體金法）3,3',4,4'-Benzophenone tetracarboxylic dianhydride242183,3',4,4'-二苯甲酮四甲酸二酐

氯霉素快速檢測卡（膠體金法）o-Anisic acid5795鄰甲酸

三聚胺快速檢測卡（膠體金法）1,2-Benzisothiazolin-one263431,2-苯并異噻唑-酮
Pazufloxacin mesilate  163680-77-1  中文名：甲磺酸帕珠沙星  分子式：C17H19FN2O7S    人脂肪分化相關(guān)蛋白(ADRP)ELISA試劑盒  

Strontium ranelate  135459-87-9  中文名：雷尼酸鍶  分子式：C12H10N2O8S    人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒  

N1-Methyl-4-nitrobenzene-1,2-diamine  41939-61-1  中文名：  分子式：C7H9N3O2    人脂多糖/內(nèi)(LPS)ELISA試劑盒  

Lapatinib  231277-92-2  中文名：拉帕替尼  分子式：C29H26ClFN4O4S    人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒           

Clopidogrel bisulfate  135046-48-9  中文名：硫酸氫氯吡格雷  分子式：C16H18ClNO6S2    人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISAKit
遠志皂苷元 HPLC≥98% 20mg Mouseai-alpha-FodrinIgG/IgA,α-FodrinIgG/IgAELISA試劑盒小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

月桂氮卓酮 GC≥98% 0.1ml Mouseai-cardiolipinaibodyIgA,ACA-IgAELISAKit小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

月桂烯（香葉烯） GC≥80% （HPLC≥95%） 0.5mL Mouseai-cardiolipinaibodyIgA,ACA-IgAELISA試劑盒小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

蕓苔素內(nèi)酯 HPLC≥95% 20mg Mouseai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISA試劑盒小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

蕓香柚皮苷 HPLC≥98% 20mg Mouseai-cardiolipinaibodyIgM,ACA-IgMELISA試劑盒小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

孕甾烯醇酮; HPLC≥98% 20mg Mouseai-cenolandcenosomeaibody,ACAELISA試劑盒小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

皂皮酸 HPLC≥98% 20mg Mouseaidiuretichormone/vasopressin/argininevasopressin,ADH/VP/AVPELISA試劑盒小鼠抗利尿激素/血管加壓素/精氨酸加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

澤蘭黃酮 HPLC≥98% 20mg Mouseai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgAELISA試劑盒小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMAIgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

澤瀉醇A HPLC≥98% 20mg Mouseai-endothelialcellaibody,AECAELISA試劑盒小鼠抗內(nèi)皮細胞抗體(AECA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

澤瀉醇A醋酸酯; HPLC≥98% 20mg MouseAi-glucoprotein210,GP210ELISA試劑盒小鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
人主動脈內(nèi)皮細胞提取物培養(yǎng)Stigmasta-4,22,25-trien-3-one  中文名：  分子式：C29H44O    Aipain,Dihydrochloride   1g              

Stigmast-5-ene-3β,7α,16β-triol  中文名：  分子式：C29H50O3    植物25羥基維生素D3elisa試劑盒   植物25羥基維生素D3試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   植物25羥基維生素D3試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：植物25羥基維生素D3試劑盒、植物25羥基維生素D3eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Stigmast-4-ene-3β,6β-diol  中文名：豆甾-4-烯-3β,6β-二醇  分子式：C29H50O2    魚孕激素elisa試劑盒   魚孕激素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   魚孕激素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：魚孕激素試劑盒、魚孕激素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Stigmast-4-ene-3,6-dione  中文名：豆甾-4-烯-3,6-二酮  分子式：C29H46O2    魚類狀腺原酸elisa試劑盒   魚類狀腺原酸試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   魚類狀腺原酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：魚類狀腺原酸試劑盒、魚類狀腺原酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Stellasterol  中文名：星魚甾醇  分子式：C28H46O    魚類皮質(zhì)醇elisa試劑盒   魚類皮質(zhì)醇試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   魚類皮質(zhì)醇試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：魚類皮質(zhì)醇試劑盒、魚類皮質(zhì)醇eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。