PrimaCell™人臍靜脈平滑肌細胞試劑盒培養

PrimaCell™人臍靜脈平滑肌細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

人抗補體1q抗體(ai-C1q-aibody)試劑盒 Human ai-C1q-aibody ELISA Kit  3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黃酮規格  3,5,6,7,8,3’,4’-heptemthoxyflavone

RabbitTissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISAKit兔組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒規格：96T/48T  873001-54-83,29-二苯甲?；闃侨嗜?/span>  3,29-Dibenzoyl Rarounitriol

載玻片細胞CREB蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20  3，6-二芥子?；崽钦f明書  3,6’－Disinapoyl sucrose

Humanβai-galactanproteinsIgGELISA試劑盒人β乳糖蛋白抗體IgGELISA試劑盒規格：96T/48T  117047-07-13’-甲氧基葛根素品牌  3’-MethoxyPuerarin

小鼠組織蛋白去乙?；?/span>(HD)ELISA試劑盒 ，英文名： HD ELISA Kit  3-羥基巴戟醌規格  3-Hydroxy-　morindone
R型三七皂苷R2  （R）Notoginsenoside R2   組織離子(Na)濃度熒光定量檢測試劑盒20

989-51-5表沒食子兒茶素沒食子酸酯規格  EGCG   組織離子(Na)濃度化學比色法定量檢測試劑盒20

98665-22-6靈芝酸G品牌  Ganoderic acid G    組織科薩基病毒B(CoxsackievirusB)定性檢測試劑盒20

98474-78-3擬人參皂苷RT5說明書  Pseudoginsenoside RT5  組織巨噬細胞型抗酸酸性1酸酶(SACP)活性比色法定量檢測試劑盒20

98296-48-1靈芝酸C2規格  Ganoderic acid C2    組織精氨酸(arginine)含量化學比色法定量檢測試劑盒20
RabbitVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAKit兔血管內皮細胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒規格：96T/48T  28649-60-7環氧續隨子醇品牌  Epoxylathyrol 

載玻片細胞IGF蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20  6873-13-8黃柏堿規格  Phellodendrine

Humanβ-siteAPP-CleavingEnzyme1，1BACE1ELISA試劑盒人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA試劑盒規格：96T/48T  751-03-1黃柏酮  Obacunone

小鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 ，英文名： TGF-β1 ELISA Kit  40246-10-4黃豆黃苷說明書  Glycitin

小鼠糖原1酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA檢測試劑盒MouseGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit 96T/48T  40957-83-3黃豆黃素品牌  Glycitein
PrimaCell™人臍靜脈平滑肌細胞試劑盒培養122021-74-3丹參酚酸B甲酯品牌  Monomethyl lithospermate B   英文名稱RatEpithelialneuophilactivatingpeptide-78ELISAKit大鼠上皮中性粒細胞活化肽(ENA-78)規格：96T/48T

122021-74-3丹參酚酸B甲酯  Monomethyl lithospermate B    英文名稱RatEpithelialneuophilactivatingpeptide-78ELISAKit大鼠上皮中性粒細胞活化肽(ENA-78)規格：96T/48T

119425-90-0龍血素B規格  Loureirin B   英文名稱RatEpinephrineELISAKit大鼠(Epinephrine)規格：96T/48T

118-34-3紫丁香苷  Syringin  英文名稱RatendotoxinELISAKit大鼠內(endotoxin)ELISAKit規格：96T/48T

1182-34-91,3-二咖啡酰奎寧酸  Cynarin   英文名稱RatendotoxinELISAKit大鼠內(endotoxin)ELISAKit規格：96T/48T

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。