我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,超低比價(jià),產(chǎn)品貨期短,價(jià)格優(yōu),售后齊全。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) | PrimaCell™人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞試劑盒說(shuō)明書 | | EYX99503 |
PrimaCell™人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 細(xì)胞培養(yǎng)方法; 1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
實(shí)驗(yàn)事項(xiàng); 1. 試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書要求保存試劑。 實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭,避免交叉污染。 2. 加樣:加樣或加試劑時(shí),請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時(shí),前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間,從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。 3. 孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。 4. 洗滌:洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。 5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí),一次不要小于10μl),以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差;請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。 6. 反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。 7. 底物:底物請(qǐng)避光保存,在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。 建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。 小鼠抗凝血酶受體(A)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseai-thrombieceptor,AELISAKit 96T/48T 6559-91-74’-去甲基表鬼臼 4’-Demethylepipodophyllotoxin 人抗型肝炎病毒抗體(ai-HCV)試劑盒 Human ai-hepatitis C virus(HCV)aibody ELISA Kit 84272-85-55-O-甲基維斯阿米醇苷說(shuō)明書 5-O-Methylvisammioside rabbitTissuefactor,TFELISAKit組織因子(TF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 77690-92-76'''-阿魏酰斯皮諾素品牌 6'''Feruloylspinosin 載玻片細(xì)胞CYP1A2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 90332-66-47-木糖基-紫杉醇規(guī)格 7-xylosyltaxol Humanβcatenin,β-CatELISA試劑盒人β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 521-32-47-去甲基銀杏雙黃酮 Bilobetin 98243-57-3梭砂貝母堿品牌 Hupehenine 組織結(jié)合(酯化)膽酶連續(xù)循環(huán)熒光定量檢測(cè)試劑盒20 98243-57-3湖貝甲素規(guī)格 Hupehenine 組織結(jié)合(酯化)膽酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20 97747-88-1鹽酸川芎嗪規(guī)格 Ligustrazine 組織結(jié)構(gòu)型神經(jīng)元合成酶(cNOS//nNOS)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20 97682-44-5伊立替康 Irinotecan 組織結(jié)構(gòu)型內(nèi)皮細(xì)胞合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20 97-59-6尿囊素說(shuō)明書 Allantoin 組織膠原蛋白(collagen)比色法定量檢測(cè)試劑盒20 Rat1,3-βDglucosidase,1,3-βD-GluELISAKit大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 54522-52-0甲基原薯蕷皂苷 Methyl protodioscin 載玻片細(xì)胞INSULIN蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 77-60-1劍麻皂苷元說(shuō)明書 Tigogenin Humanγ-glamylsysteinesyhetase,γ-ECSELISA試劑盒人γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 458-37-7姜黃素品牌 Curcumin 小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA試劑盒 ,英文名: MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ ELISA Kit 122-48-5姜酮規(guī)格 Zingerone 小鼠抗酸酸性1酸酶5b(ACP-5b)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousetarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit 96T/48T 94987-08-3絞股藍(lán)皂苷XLIX Gypenoside XLIX PrimaCell™人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞試劑盒說(shuō)明書1241-87-81-咖啡酰奎寧酸 Cyclohexanecarboxylicacid 英文名稱RatE-SelectinELISAkit大鼠E選擇素(E-Selectin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 123748-68-5七葉皂苷A規(guī)格 Escin IA 英文名稱RatEsadiol(E2)ELISAkit大鼠雌二醇(E2)ELISAKit規(guī)格:96T/48T 123350-57-25補(bǔ)充中2說(shuō)明書 Hederagenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-α-L-arabinopyranoside 英文名稱RatEsadiol(E2)ELISAkit大鼠雌二醇(E2)ELISAKit規(guī)格:96T/48T 122-48-5姜酮規(guī)格 Zingerone 英文名稱RatERELISAKit大鼠雌二醇受體(ER)規(guī)格:96T/48T 122413-01-8雞屎藤苷酸甲酯 paederosidic acid methyl ester 英文名稱RatERELISAKit大鼠雌二醇受體(ER)規(guī)格:96T/48T 注意事項(xiàng); 1. 接收到,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。 3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。 4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。 7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 |