大鼠視網膜色素上皮細胞提取物培養(yǎng)

大鼠視網膜色素上皮細胞提取物【Rat Eye: Normal Retinal Pigment Epithelial Cells Derivatives】

大鼠視網膜色素上皮細胞提取物是從大鼠原代視網膜色素上皮細胞提取的，大鼠原代視網膜色素上皮細胞從正常大鼠眼組織制備。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

登革熱病毒通用單重熒光PCR檢測試劑盒48Tolvaptan168托伐普坦

登革熱病毒Ⅰ型單重熒光PCR檢測試劑盒48Abiraterone acetate1542298乙酸阿比特龍酯

登革熱病毒Ⅱ型單重熒光PCR檢測試劑盒48Esomeprazole 1617968埃索美拉唑鈉

登革熱病毒Ⅲ型單重熒光PCR檢測試劑盒48Clevidipine butyrate1672211丁酸氯維地平

登革熱病毒Ⅳ型單重熒光PCR檢測試劑盒48Azilsartan14733阿齊沙坦
Glaraldehydesolion   500ml  Anthraquinone  84-65-1  中文名：蒽醌  分子式：C14H8O2 

Glaraldehydesolion   500ml                 Anthraglycoside B  中文名：大黃素-8-O-葡萄糖苷  分子式：C21H20O10 

G-418抗菌素   1g  4,4'-Bis(diethylamino)benzophenone  中文名：四乙基米氏酮  分子式：C21H28N2O  度：98.0%

G-418Sulfate   5g                 4,4'-Bis(diethylamino)benzophenone  中文名：四乙基米氏酮  分子式：C21H28N2O 

FuchsinAcid   25g  4,4'-Cyclohexylidenebisphenol  843-55-0  中文名：4,4'-環(huán)亞己基雙苯酚  分子式：C18H20O2
松柏醇  Coniferyl alcohol  質量規(guī)格：>98%,sigma223735 人游離蛋白S(FP-S)ELISA檢測試劑盒HumanFreeProteinS,FP-SELISAKit 96T/48T

乙酰輔酶A鈉鹽  Acetyl coenzyme A  salt    質量規(guī)格：≥93%,美國進口 人游離血紅蛋白(f-Hb)ELISA檢測試劑盒Humanfreehaemoglobin,f-HbELISAKit 96T/48T

肌苷酸二鈉  Di 5'-Inosinate  質量規(guī)格：>98%,BR 人游離原卟啉(FEP)ELISA檢測試劑盒HumanFreeerythrocyteproloporphyrin,FEPELISAKit 96T/48T

環(huán)索奈德  Ciclesonide  質量規(guī)格：>99%,BR 人誘導型合成酶(iNOS)ELISA檢測試劑盒Humaninducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKIT 96T/48T

環(huán)索奈德(標準品)  Ciclesonide  質量規(guī)格：>99%,標準品 人魚精蛋白(Protamine)ELISA檢測試劑盒HumanProtamineELISAKit 96T/48T

酪氨酰氨  L-Tyrosine amide  質量規(guī)格：>98%,sigma進分 人粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA檢測試劑盒HumanMucin-5subtypeAC,MUC5ACELISAKit 96T/48T

皂素；茶皂素  saponin  質量規(guī)格：BR,皂素>80% 人著絲粒蛋白B(CENP-B)ELISA檢測試劑盒HumanCenomereProtein,CENP-BELISAKit 96T/48T

炔諾酮(標準品)  Norethindrone  質量規(guī)格：>97%,標準品 人脂0壁酸(LTA)ELISA檢測試劑盒Humanlipoteichoicacids,LTAELISAKit 96T/48T

炔諾酮  Norethindrone  質量規(guī)格：>97% 人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)ELISA檢測試劑盒HumanLipoarabinomannan,LAMELISAKit 96T/48T

可的松(標準品)  Cortisone  質量規(guī)格：HPLC>95%,標準品 人脂多糖/內(LPS)ELISA檢測試劑盒HumanLipopolysaccharides,LPSELISAKit 96T/48T
大鼠視網膜色素上皮細胞提取物培養(yǎng)山羊壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒     3-Cyclopropylmethoxy-4-difluoromethoxybenzoic acid  162401-62-9  中文名：  分子式：C12H12F2O4  度：98.0%  關鍵詞： 

山羊骨形成蛋白2（BMP-2）ELISA試劑盒         組裝/原裝  3-Ethyl-4-methyl-3-pyrrolin-2-one  中文名：  分子式：C7H11NO  度：98.0%

山羊孤啡肽（OFQ/N）ELISA試劑盒              3-Ethyl-4-methyl-3-pyrrolin-2-one  中文名：  分子式：C7H11NO 

山羊促生長激素釋放激素elisa試劑盒   山羊促生長激素釋放激素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   山羊促生長激素釋放激素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：山羊促生長激素釋放激素試劑盒、山羊促生長激素釋放激素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  3-Chloro-4-(3-fluorobenzyloxy)nitrobenzene  443882-99-3  中文名：  分子式：C13H9ClFNO3  度：98.0%  關鍵詞： 

山羊促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒     3-Chloro-1-(4-octylphenyl)-1-propanone  928165-59-7  中文名：  分子式：C17H25ClO  度：98.0%  關鍵詞：

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。