人血管內皮細胞提取物培養

人血管內皮細胞提取物【Human Vascular: Normal Vascular Endothelial Cell Derivatives】

人血管內皮細胞提取物是從人原代血管內皮細胞提取的，人原代血管內皮細胞從正常人血管內皮組織制備。正常人血管內皮組織采集自各地方醫院，采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

寨卡病毒實時熒光PCR檢測試劑盒TTestosterone582睪酮

中東呼吸道綜合征(MERS)病毒三重實時熒光PCR確證試劑盒TTestosterone undecanoate59494十一酸睪酮

扎伊爾型埃博拉病毒（EBOV-Z）雙重實時熒光PCR檢測試劑盒TTestosterone propionate575睪酮

細菌DNA快速提取試劑盒TTestosterone phenylpropionate12559苯睪酮

alignment marker 15 bp/2 kb size marker 0bp.5kb套裝Testosterone isocaproate152626異己酸睪酮
Panaxydiol  中文名：  分子式：C17H24O2    人葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISAKit  

Palmitone  中文名：棕櫚酮  分子式：C31H62O    人胰島素原(PI)ELISAKit  

Oxytetracycline hydrochloride  中文名：鹽酸土霉素  分子式：C22H25ClN2O9    人胰島素受體β(ISR-β)ELISAKit              

Oxymetholone  中文名：康復龍  分子式：C21H32O3    中文名稱   方法   規格

Oxiracetam  中文名：奧拉西坦  分子式：C6H10N2O3    人瘦素受體(LEPR)ELISAKit
鳶尾苷(標準品)  Tectoridin  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠精酸/絲酸豐富剪接因子4(SRSF4)ELISA試劑盒 ，英文名： SRSF4 ELISA Kit

鳶尾黃素（標準品）  Tectorigenin  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠精酸加壓素受體1B(AVPR1B)ELISA試劑盒 ，英文名： AVPR1B ELISA Kit

原B2(標準品)  Procyanidin B2  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠精酸加壓素原(VP)ELISA試劑盒 ，英文名： VP ELISA Kit

原人參二醇（標準品）  Protopanaxdiol  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠精酸酶(Arg)ELISA試劑盒 ，英文名： Arg ELISA Kit

原人參三醇(標準品)  Protopanaxatriol  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠靜止素Q6硫基氧化酶1(QSOX1)ELISA試劑盒 ，英文名： QSOX1 ELISA Kit

原薯蕷皂苷(標準品)  Protodioscin  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠巨嗜細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2)ELISA試劑盒 ，英文名： MCP-1/CCL2 ELISA Kit

原蘇木素B/原巴西蘇木素（標準品）  Protosappanin B  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠巨嗜細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒 ，英文名： MCP-1/CCL2/MCAF ELISA Kit

遠志酸（標準品）  Polygalacic acid  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA檢測試劑盒MouseMacrophageColony-StimulatingFactor,M-CSFELISAkit 96T/48T

遠志皂苷元(標準品)  Senegenin  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠巨噬細胞集落刺激因子(MCSF)ELISA試劑盒 ，英文名： MCSF ELISA Kit

月桂烯（香葉烯）  Myrcene  質量規格：HPLC≥80%，標準品 小鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒 ，英文名： M-CSF ELISA Kit
人血管內皮細胞提取物培養Stigmastane-3β,5α,6β-triol  中文名：豆甾-3β,5α,6β-三醇  分子式：C29H52O3  度：96.5%  兔基質金屬蛋白9（MMP-9）ELISA試劑盒  

7α-Hydroxysitosterol  中文名：7α-羥基谷甾醇  分子式：C29H50O2  度：95.0%  兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒  

Ecdysterone 20,22-monoacetonide  中文名：  分子式：C30H48O7  度：98.0%  兔環0酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒  

Ergosta-5,24(28)-diene-3β,7α,16β-triol  中文名：  分子式：C28H46O3  度：97.5%  兔核因子κB受體活化因子配基（RANKL）ELISA試劑盒           

Qingyangshengenin  中文名：青陽參苷元  分子式：C28H36O8  度：97.5%  兔肌紅蛋白(rabbit Myoglobin)   作用：   ELISA   規格：   48T/96T   進口分裝

 運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。