人血管內(nèi)皮細胞提取物培養(yǎng)

人血管內(nèi)皮細胞提取物【Human Vascular: Normal Vascular Endothelial Cell Derivatives】

人血管內(nèi)皮細胞提取物是從人原代血管內(nèi)皮細胞提取的，人原代血管內(nèi)皮細胞從正常人血管內(nèi)皮組織制備。正常人血管內(nèi)皮組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

寨卡病毒實時熒光PCR檢測試劑盒TTestosterone582睪酮

中東呼吸道綜合征(MERS)病毒三重實時熒光PCR確證試劑盒TTestosterone undecanoate59494十一酸睪酮

扎伊爾型埃博拉病毒（EBOV-Z）雙重實時熒光PCR檢測試劑盒TTestosterone propionate575睪酮

細菌DNA快速提取試劑盒TTestosterone phenylpropionate12559苯睪酮

alignment marker 15 bp/2 kb size marker 0bp.5kb套裝Testosterone isocaproate152626異己酸睪酮
Panaxydiol  中文名：  分子式：C17H24O2    人葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISAKit  

Palmitone  中文名：棕櫚酮  分子式：C31H62O    人胰島素原(PI)ELISAKit  

Oxytetracycline hydrochloride  中文名：鹽酸土霉素  分子式：C22H25ClN2O9    人胰島素受體β(ISR-β)ELISAKit              

Oxymetholone  中文名：康復(fù)龍  分子式：C21H32O3    中文名稱   方法   規(guī)格

Oxiracetam  中文名：奧拉西坦  分子式：C6H10N2O3    人瘦素受體(LEPR)ELISAKit
鳶尾苷(標準品)  Tectoridin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠精酸/絲酸豐富剪接因子4(SRSF4)ELISA試劑盒 ，英文名： SRSF4 ELISA Kit

鳶尾黃素（標準品）  Tectorigenin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠精酸加壓素受體1B(AVPR1B)ELISA試劑盒 ，英文名： AVPR1B ELISA Kit

原B2(標準品)  Procyanidin B2  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠精酸加壓素原(VP)ELISA試劑盒 ，英文名： VP ELISA Kit

原人參二醇（標準品）  Protopanaxdiol  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠精酸酶(Arg)ELISA試劑盒 ，英文名： Arg ELISA Kit

原人參三醇(標準品)  Protopanaxatriol  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠靜止素Q6硫基氧化酶1(QSOX1)ELISA試劑盒 ，英文名： QSOX1 ELISA Kit

原薯蕷皂苷(標準品)  Protodioscin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠巨嗜細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2)ELISA試劑盒 ，英文名： MCP-1/CCL2 ELISA Kit

原蘇木素B/原巴西蘇木素（標準品）  Protosappanin B  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠巨嗜細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA試劑盒 ，英文名： MCP-1/CCL2/MCAF ELISA Kit

遠志酸（標準品）  Polygalacic acid  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA檢測試劑盒MouseMacrophageColony-StimulatingFactor,M-CSFELISAkit 96T/48T

遠志皂苷元(標準品)  Senegenin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品 小鼠巨噬細胞集落刺激因子(MCSF)ELISA試劑盒 ，英文名： MCSF ELISA Kit

月桂烯（香葉烯）  Myrcene  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥80%，標準品 小鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒 ，英文名： M-CSF ELISA Kit
人血管內(nèi)皮細胞提取物培養(yǎng)Stigmastane-3β,5α,6β-triol  中文名：豆甾-3β,5α,6β-三醇  分子式：C29H52O3  度：96.5%  兔基質(zhì)金屬蛋白9（MMP-9）ELISA試劑盒  

7α-Hydroxysitosterol  中文名：7α-羥基谷甾醇  分子式：C29H50O2  度：95.0%  兔肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒  

Ecdysterone 20,22-monoacetonide  中文名：  分子式：C30H48O7  度：98.0%  兔環(huán)0酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒  

Ergosta-5,24(28)-diene-3β,7α,16β-triol  中文名：  分子式：C28H46O3  度：97.5%  兔核因子κB受體活化因子配基（RANKL）ELISA試劑盒           

Qingyangshengenin  中文名：青陽參苷元  分子式：C28H36O8  度：97.5%  兔肌紅蛋白(rabbit Myoglobin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

 運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。