大鼠角膜上皮細胞提取物說明書

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大鼠角膜上皮細胞提取物【Rat Eye: Normal Corneal Epithelial CellsDerivatives】

大鼠角膜上皮細胞提取物是從大鼠原代角膜上皮細胞提取的，大鼠原代角膜上皮細胞從正常大鼠眼組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。
    如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

單純皰疹病毒Ⅱ型核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）盒Sulfamonomethoxine 3068磺胺間甲氧嘧啶鈉

細菌耐藥基因KPC檢測試劑盒（PCR熒光探針法）盒Sulfamethoxazole7236磺胺甲噁唑

人感染H7N9病毒RNA檢測試劑盒(熒光PCR法)盒Sulfamethazine578磺胺二甲嘧啶

淋球菌核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）盒Sulfaguanidine577磺胺脒

解脲脲原體核酸檢測試劑盒（PCR熒光探針法）盒Sulfadiazine685磺胺嘧啶
Ganciclovir  82410-32-0  中文名：更昔洛韋  分子式：C9H13N5O4    HumanCystatinC,Cys-CELISA試劑盒人半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Oxiracetam  62613-82-5  中文名：奧拉西坦  分子式：C6H10N2O3    組織HHV6(HUMANHERPESVIRUS6)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次

Piracetam  7491-74-9  中文名：吡拉西坦  分子式：C6H10N2O2    HumanpodocinELISAKit人PodocinELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Fudosteine  13189-98-5  中文名：福多斯坦  分子式：C6H13NO3S    豚鼠α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒 ，英文名： IFN-α ELISA Kit

Betaxolol hydrochloride  63659-19-8  中文名：鹽酸倍他洛爾  分子式：C18H30ClNO3    Human lung cancer marker DR-70 (DR-70TM) ELISA Kit 人肺癌標志物DR-70(DR-70TM)ELISA試劑盒
四螨嗪(標準品)  Clofentezine  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,98.6% 犬黃體生成素(LH)試劑盒 Canine Leinizing Hormone,LH ELISA Kit

四螨嗪標準溶液(100μg/ml,u=4%)  Clofentezine solution  質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=4% 犬肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA檢測試劑盒CanineoponinⅠ,Tn-ⅠELISAKit 96T/48T

四螨嗪標準溶液(10μg/ml,u=6%)  Clofentezine solution  質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=6% 犬肌酐(Cr)試劑盒 Canine Creatinine,CR ELISA KIT

萎銹靈(標準品)  Carboxine  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,99.9% 犬肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA檢測試劑盒CanineMyoglobin,MYO/MBELISAKit 96T/48T

環(huán)己醇(Standard for GC,>99.0%(GC))  Cyclohexanol  質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,>99.0%(GC) 犬肌紅蛋白(MYO/MB)試劑盒 Dog Myoglobin,MYO/MB ELISA Kit

敵草索(標準品)   Dacthal  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品 犬肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)試劑盒 Canine Creatine Kinase MB isoenzyme,CK-MB ELISA Kit

1-氯辛烷(標準品)  1-Chlorooctane  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品 犬基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)試劑盒 Canine Maix metalloproteinase 1,MMP-1 ELISA kit

十二烷(標準品)  Dodecane  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,>99.7%(GC) 犬基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)試劑盒 Canine Maix metalloproteinase 13,MMP-13 ELISA kit

鉍標準溶液(100mg/L,基體: 5％HNO3)  Bismuth solution  質(zhì)量規(guī)格：100mg/L,基體: 5％HNO3 犬基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)試劑盒 Canine Maix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA kit

銅標準溶液(1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3)  Copper solution  質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3 犬基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)試劑盒 Dog Maix metalloproteinase 3,MMP-3 ELISA kit
大鼠角膜上皮細胞提取物說明書神經(jīng)絲蛋白   英文名稱：   neurofilame protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   NF  Tetracaine  中文名：丁卡因  分子式：C15H24N2O2 

神經(jīng)絲蛋白   英文名稱：   neurofilame protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   NF  Tetracaine  94-24-6  中文名：丁卡因  分子式：C15H24N2O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

神經(jīng)生長因子受體   英文名稱：    nerve growth factor  receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   NGFR  3'-Hydroxygynuramide II  1401093-57-9  中文名：  分子式：C42H83NO6 

神經(jīng)生長因子   英文名稱：    nerve growth factor    規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   NGF  3'-Hydroxygynuramide II  1401093-57-9  中文名：  分子式：C42H83NO6  度：%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒     3-Hydroxychimaphilin  33253-99-5  中文名：3-羥基梅笠草素  分子式：C12H10O3

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。