PrimaCell™小鼠角膜成纖維細胞試劑盒培養

PrimaCell™小鼠角膜成纖維細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

英文名稱HumanacetylcholineELISAKit人乙酰膽堿(Ach)ELISA試劑盒規格：96T/48T  521-88-0水黃皮素  Karanjin

化大鼠腎上腺髓質素(AM)基因重組表達載體(pCMV5-AM)10微克  5945-50-6水晶蘭苷說明書  Monotropein

RathighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISA試劑盒大鼠超敏C反應蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒規格：96T/48T  5945-50-6水晶蘭苷品牌  Monotropein

小鼠脂肪酸合酶(FASN)ELISA試劑盒 ，英文名： FASN ELISA Kit  604-80-8水仙苷規格  Narcissoside

神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA檢測試劑盒Monkeyglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISAKit 96T/48T  29477-83-6水仙環素  Narciclasine
39432-56-9刺五加苷E  Eleutheroside E   載玻片細胞TSH-BETA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20

39262-14-1人參皂苷CK規格  Compound CK  載玻片細胞TNFBETA蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

39262-14-1人參皂苷CK  Ginsenoside CK   載玻片細胞TNFBETA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20

39012-20-9胡黃連苷II說明書  Picroside II   載玻片細胞TNFALPHA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20

39011-92-2特女貞苷規格  Specnuezhenide   載玻片細胞RyR受體蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20
山羊主要組織相容性復合體(MHC/OLA)ELISA檢測試劑盒Goatmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/OLAELISAKit 96T/48T  70553-76-3蝙蝠葛蘇林堿  Daurisoline 

犬血栓前體蛋白(TpP)試劑盒 Canine thrombus precursor protein,TpP ELISA Kit  524-17-4蝙蝠葛堿說明書  Dauricine 

英文名稱Mouse14-3-3proteinELISAKit小鼠14-3-3蛋白(14-3-3pro)規格：96T/48T  1258-84-0扁塑藤素品牌  Pristimerin

腸集聚型大腸埃希菌(EeroaggregativeE.coli)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20  572-30-5扁蓄苷規格  Avicularin

RatGamma-aminobyricacid,GABAELISA試劑盒大鼠γ氨基(GABA)ELISA試劑盒規格：96T/48T  524-17-4蝙蝠葛堿  Dauricine
PrimaCell™小鼠角膜成纖維細胞試劑盒培養5088-90-4蓮心堿高氯酸鹽  Liensinine Perchlorate   植物乙酰輔酶A膽乙酰轉移酶(ACAT)活性比色法定量檢測試劑盒20

508-02-1齊墩果酸規格  Oleanolic acid   植物乙醇脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒20

50773-41-6重樓皂苷I規格  Polyphyllin I  植物乙醇酸氧化酶(glycolateoxidase)活性比色法定量檢測試劑盒20

5058-13-9二氫歐山芹醇當歸酸酯  Columbianadin   植物葉片活性葉綠體分離試劑盒20

50-55-5利血平品牌  Reserpine  植物葉綠體總蛋白定量檢測試劑盒20

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。