產(chǎn)品名稱 | PrimaCell™小鼠角膜成纖維細胞試劑盒培養(yǎng) | 英文名稱 | | 貨號 | EYX99615 |
PrimaCell™小鼠角膜成纖維細胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
實驗要點及說明; 1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率; 5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作要點; 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。 5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。 英文名稱HumanacetylcholineELISAKit人乙酰膽堿(Ach)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 521-88-0水黃皮素 Karanjin 化大鼠腎上腺髓質(zhì)素(AM)基因重組表達載體(pCMV5-AM)10微克 5945-50-6水晶蘭苷說明書 Monotropein RathighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISA試劑盒大鼠超敏C反應蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 5945-50-6水晶蘭苷品牌 Monotropein 小鼠脂肪酸合酶(FASN)ELISA試劑盒 ,英文名: FASN ELISA Kit 604-80-8水仙苷規(guī)格 Narcissoside 神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA檢測試劑盒Monkeyglialfibrillaryacidicprotein,GFAPELISAKit 96T/48T 29477-83-6水仙環(huán)素 Narciclasine 39432-56-9刺五加苷E Eleutheroside E 載玻片細胞TSH-BETA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 39262-14-1人參皂苷CK規(guī)格 Compound CK 載玻片細胞TNFBETA蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20 39262-14-1人參皂苷CK Ginsenoside CK 載玻片細胞TNFBETA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 39012-20-9胡黃連苷II說明書 Picroside II 載玻片細胞TNFALPHA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 39011-92-2特女貞苷規(guī)格 Specnuezhenide 載玻片細胞RyR受體蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 山羊主要組織相容性復合體(MHC/OLA)ELISA檢測試劑盒Goatmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/OLAELISAKit 96T/48T 70553-76-3蝙蝠葛蘇林堿 Daurisoline 犬血栓前體蛋白(TpP)試劑盒 Canine thrombus precursor protein,TpP ELISA Kit 524-17-4蝙蝠葛堿說明書 Dauricine 英文名稱Mouse14-3-3proteinELISAKit小鼠14-3-3蛋白(14-3-3pro)規(guī)格:96T/48T 1258-84-0扁塑藤素品牌 Pristimerin 腸集聚型大腸埃希菌(EeroaggregativeE.coli)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20 572-30-5扁蓄苷規(guī)格 Avicularin RatGamma-aminobyricacid,GABAELISA試劑盒大鼠γ氨基(GABA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 524-17-4蝙蝠葛堿 Dauricine PrimaCell™小鼠角膜成纖維細胞試劑盒培養(yǎng)5088-90-4蓮心堿高氯酸鹽 Liensinine Perchlorate 植物乙酰輔酶A膽乙酰轉(zhuǎn)移酶(ACAT)活性比色法定量檢測試劑盒20 508-02-1齊墩果酸規(guī)格 Oleanolic acid 植物乙醇脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒20 50773-41-6重樓皂苷I規(guī)格 Polyphyllin I 植物乙醇酸氧化酶(glycolateoxidase)活性比色法定量檢測試劑盒20 5058-13-9二氫歐山芹醇當歸酸酯 Columbianadin 植物葉片活性葉綠體分離試劑盒20 50-55-5利血平品牌 Reserpine 植物葉綠體總蛋白定量檢測試劑盒20 運輸和保存; 視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。 1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。 2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。 |