PrimaCell™人心肌細胞試劑盒培養

PrimaCell™人心肌細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

小鼠組織蛋白酶G(CTSG)ELISA試劑盒 ，英文名： CTSG ELISA Kit  19121-58-5澳洲茄堿規格  Solasonine

綿羊主要組織相容性復合體(MHC)ELISA檢測試劑盒Sheepmajorhistocompatibilitycomplex,MHCELISAKit 96T/48T  32981-86-510-脫乙酰基巴卡丁III  Deacetylbaccatin III

犬胰島素樣生長因子1(IGF1)試劑盒 Dog insulin-like growth factor 1,IGF1 ELISA kit  27548-93-2巴卡亭Ⅲ說明書  baccatin Ⅲ

英文名稱MouseAGRPELISAKit小鼠Agoi相關蛋白(AGRP)ELISA試劑盒規格：96T/48T  26091-79-2白當歸腦品牌  Byakangelicol

薄層色譜分析20樣本  19573-01-4白當歸素規格  Byakangelicin
906-33-2新綠原酸說明書  Neochlorogenic acid  組織二(MDA)比色法定量檢測試劑盒50/100

905-99-7隱綠原酸品牌  Cryptochlorogenic acid  組織短鏈脂酰輔酶A脫氫酶(ACYLCOADEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測試劑盒20

90332-66-47-木糖基-紫杉醇規格  7-xylosyltaxol   組織短鏈脂酰輔酶A合成酶(ACYLCOASYHETASE)活性酶連續循環比色法定量檢測試劑盒20

8-乙氧基滇烏堿品牌  8-O-ethylyunaconitine   組織短鏈烯脂酰輔酶A水合酶(ENOYLCOAHYDRATASE)活性比色法定量檢測試劑盒20

89590-98-7羅漢果苷VI品牌  Mogroside VI   組織丁酰膽堿酯酶活性熒光定量檢測試劑盒20
RatAngiopoietin4,ANG-4ELISAKit大鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA試劑盒規格：96T/48T  30045-16-0脫氫紫堇堿  Dehydrocorydaline

載玻片細胞樣品細胞色素C蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20  518-69-4延胡索甲素說明書  （+）- Corydaline

Mouseadvancedglycationendproducts,AGEsELISA試劑盒小鼠晚期糖基化終末產物(AGEs)ELISA試劑盒規格：96T/48T  437-64-9芫花素品牌  Genkwanin

小鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒 ，英文名： apo-B100 ELISA Kit  529-53-3野黃芩素規格  Scutellarein

小鼠抗心1脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA檢測試劑盒Mouseai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISAKit 96T/48T  480-39-7喬松素  Pinocembrin
PrimaCell™人心肌細胞試劑盒培養133-05-1細辛脂素  Asarinin   英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡素(FSH)規格：96T/48T

133-04-0細辛脂素  Asarinin  英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡素(FSH)規格：96T/48T

13241-33-3新橙皮苷說明書  Neohesperidin   英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡生長激素(RatFSH)規格：96T/48T

13241-33-3新橙皮苷規格  Neohesperidin  英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡生長激素(RatFSH)規格：96T/48T

13241-28-6大黃酚-8-O-葡萄糖苷品牌  Chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside   英文名稱RatFree-TestoteroneELISAKit大鼠游離睪同(Free-Testoterone)規格：96T/48T

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。