人食管平滑肌細(xì)胞提取物

人食管平滑肌細(xì)胞提取物【Human Esophageal: Normal Esophageal Smooth Muscle Cell Derivatives】

人食管平滑肌細(xì)胞提取物是從人原代食管平滑肌細(xì)胞提取的，人原代食管平滑肌細(xì)胞從正常人食管組織制備。正常人食管組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

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細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

成分殘留檢測試紙條Cabozantinib8492178卡博替尼

可樂定殘留檢測試紙條Butenafine hydrochloride18276鹽酸布替萘芬

西馬特羅殘留檢測試紙條Bupivacaine hydrochloride10鹽酸布比卡因

卵黃蛋白快速檢測膠體金試紙條Bufotalin4715蟾毒它靈

己烯雌酚殘留檢測試紙條Buergerinin G2637643
Otophylloside T  1642306-14-6  中文名：  分子式：C48H70O18  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  抗抑郁; 孕甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠組織因子(mouse TF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Otophylloside O  1326583-08-7  中文名：  分子式：C56H84O20  度：96.5%  關(guān)鍵詞：  孕甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠組織因子抑制物(mouse TFPI)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  

Otophylloside F  250217-73-3  中文名：青陽參苷F  分子式：C48H76O16  度：95.0%  關(guān)鍵詞：  抗癲癇; 孕甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠性激素結(jié)合球蛋白(mouse SHBG)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Otophylloside B 4'''-O-β-D-oleandropyranoside  168001-54-5  中文名：  分子式：C56H90O19  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  孕甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠超氧化物歧化酶(mouse SOD)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside  171422-85-8  中文名：  分子式：C56H90O19  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  孕甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠生長抑素(mouse Somatostatin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝
油酸酰胺(>65.0%(GC))  Oleamide  質(zhì)量規(guī)格：>65.0%(GC) 英文名稱HumanBone-specificAlkphase-BELISAKit人骨特異性堿性0酸酶(ALP-B)規(guī)格：96T/48T

正辛酰胺(>98.0%(GC)(N))  n-Oct*  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(N) 英文名稱HumanBrainderivedneuroophicfacorELISAKit人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

硬脂酰胺(>90.0%(GC))  Stearamide  質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC) 英文名稱HumancalcitoningenerelatedpeptideELISAKit人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)規(guī)格：96T/48T

丁基鄰苯二甲酰羥乙酸丁酯(>95.0%(GC))  Butyl Phthalyl Butyl Glycolate  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC) 英文名稱HumancAMPElisaKit人環(huán)-0酸腺苷(cAMP)規(guī)格：96T/48T

間苯二酸雙(2-乙基己基)酯(>98.0%(GC))  Bis(2-ethylhexyl) Isophthalate  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱HumancarbonicanhydraseELISAKit人酶(CA)規(guī)格：96T/48T

三戊酯(>98.0%(GC))  Triamyl Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱HumancardiacoponinIELISAKit人心肌肌鈣蛋白I(cTNI)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

三(2-氯乙基)酯(>97.0%(GC))  Tris(2-chloroethyl) Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC) 英文名稱Humancardioophln-lELISAKit人心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

三(1,3-二氯-2-丙基)酯(>95.0%(GC))  Tris(1,3-dichloro-2-propyl) Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC) 英文名稱HumanCCL11ELISAKit人CCL11規(guī)格：96T/48T

三(2-氧乙基)酯(>95.0%(GC))  Tris(2-butoxyethyl) Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC) 英文名稱HumanCCL17ELISAKit人CCL17規(guī)格：96T/48T

2-乙基己基二苯酯(>90.0%(GC))  2-Ethylhexyl Diphenyl Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC) 英文名稱HumanCCL1ELISAKit人CCL1規(guī)格：96T/48T
人食管平滑肌細(xì)胞提取物Sulfaguanidine  中文名：磺胺脒  分子式：C7H10N4O2S    脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白 (FABP4)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Sulfadiazine  中文名：磺胺嘧啶  分子式：C10H10N4O2S    凋亡相關(guān)因子 (Fas/Apo-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Sulfaclozine  中文名：磺胺氯吡嗪  分子式：C10H9ClN4O2S    凋亡相關(guān)因子配體 (Fas-L)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Sucrose  中文名：  分子式：C12H22O11    胎球蛋白 -A(Fetuin-A)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  

Succinic acid  中文名：  分子式：C4H6O4    脂褐質(zhì)測試盒   Lipfuscin test box