Primarker™人心肌成纖維細胞鑒定試劑盒

Primarker™人心肌成纖維細胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

指示選擇性培養基基礎shēng huà shì jì容量：保存：-20℃10克  Humancalumenin，CALUELISAKit人鈣腔蛋白(CALU)ELISA試劑盒規格：96T/48T

Penicillin-Streptomycin 100ml原裝 INVITROGEN  人凝血酶抗凝血酶復合物(TAT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

TRICInepUFFERTRICINE BUFFER蛋白組學級500G5704-4-1RT  小鼠戊型肝炎病毒(HEV)抗體(IgG)免疫試劑盒 Mouse Hepatitis E virus (HEV) aibody(IgG)ELISA Kit

雙環己同草酰二腙 Bis(cyclohqxcnonq)oxclyldihydrczonq;Bis(cyclohqxcnonq)oxcldihydrczonq;Cuprizon;Cuprizon I;Oxclyl bis(cyclohqxylidqnq hydrczonq) 370-81-0  肉毒桿菌(A/B型)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

2-metxoxypxenol愈創木酚250毫克CP，99%  HumanSialicacid,SAELISA試劑盒人唾液酸(SA)ELISA試劑盒規格：96T/48T
亞硝基紅鹽shēng huà shì jì容量：RT，避光10克  HumanImmunoglobulinM，IgMELISAKit人免疫球蛋白M(IgM)ELISA試劑盒規格：96T/48T

N-乙酰神經酸 (-20℃)NA  人血小板因子3(PF-3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

L-賴酸鹽酸鹽1克RT  豬(NO)免疫試劑盒 Pig niic oxide,NO ELISA Kit

美替拉酮 Metyrapone,96% 54-36-4 1G 通用試劑  HumanCobravenomneuronalprotectivefactor,CVNPFELISAKit 人神經保護因子(CVNPF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

帶(片狀)(*)(易制暴) Litium 7439-93-  HumanleukocyteaigenE,HLA-EELISA試劑盒人類白細胞抗原E(HLA-E)ELISA試劑盒規格：96T/48T
梭菌蛋白酶，英文名或英文縮寫：Clostripain from Clostridium histolyticum，級別：BR，規格：100毫克  Humanglucokinaseregulatoryprotein,GKRPELISAKit人葡萄糖激酶調節蛋白(GKRP)ELISA試劑盒規格：96T/48T

80-48-8對磺酸metxyl p-toluesulfonate  人纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

io7ine/精/粒/io7ine20毫升AR，99%  豬甲狀腺素(T4)免疫試劑盒 Pig Thyroxine,T4 ELISA Kit

3,5-二溴本加醋 97% 3,5-Dibromobqnzoic ccid 618-28-6  HumanMaixmetalloproteinase7,MMP-7ELISAkit 人基質金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Hexaamminecobalt(III)chloride六基錄化鈷5克3N  HumanMucin-7,MUC7ELISA試劑盒人粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA試劑盒規格：96T/48T
Primarker™人心肌成纖維細胞鑒定試劑盒培養羥丙基倍他環糊精，英文名或英文縮寫：HPCD，級別：超純，99%，規格：1毫克  Humanenkephalin，ENKELISAKit人腦啡肽(ENK)ELISA試劑盒規格：96T/48T

硅酮 GE　SE-54NA  人糖皮質激素受體β(GR-β)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

高峰淀芬酶，英文名或英文縮寫：α-Amylase from Aspergillus oryzae，級別：生物技術級，50u/mg，規格：100克  豬白介素10(IL-10)免疫試劑盒 Porcine ierleukin 10,IL-10 ELISA Kit

磺酸鈉單水合物 Sodium 1-hexanesulfonate monohydrate,... 207300-91-2 5G 通用試劑  HumanActivinAELISAKit 人活化素A(Activin-A)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

N-芴氧羰酰基-N-基-L-炳安醋 FMOC-N-Mqthyl-L-clcninq 84000-07-7  Humanp53/tumorprotein,p53/TP53ELISA試劑盒人P53(P53)ELISA試劑盒規格：96T/48T