Primarker™人血管內皮細胞鑒定試劑盒說明

Primarker™人血管內皮細胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

指示選擇性培養基基礎10克保存：-20℃  小鼠25羥基膽固醇(25-OHC)ELISA試劑盒 ，英文名： 25-OHC ELISA Kit

20769-85-12-溴-2-甲基2-Bromo-2-metxylpropionyl bromide  牛甘膽酸(CG)ELISA檢測試劑盒Bovinecholyglycine,CGELISAKit 96T/48T

酸鉀shēng huà shì jì容量：1克  人B群鏈球菌多糖抗體(IgG)免疫試劑盒 Human Ai-Group B Septococcal Type III Capsular Aibody IgG ELISA Kit

2，3-二基丁烷　標準品 2,3-DIMqTHYLBUTcNq 1979/9/8  英文名稱MouseEGFELISAKit小鼠表皮生長因子(EGF)規格：96T/48T

碳酸銅shēng huà shì jì容量：RT5克  冰凍切片脂肪酸費斯克勒(Fischler)染色試劑盒50次
亞硝基-R-鹽，英文名或英文縮寫：nitnoso R salt，級別：BS，規格：25克  人表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

30%(*);二氧化氫;二氧化二氫xy7nogen Peroxide Concentrate  豚鼠γ干擾素(IFN-γ)免疫試劑盒 guinea pig Ierferon γ ,IFN-γ ELISA Kit

青鮮素鉀鹽，英文名或英文縮寫：Maleic hydrazide potewwium salt，級別：BR，98%，規格：25毫克  四氫生物蝶呤(BH4)ELISA試劑盒 ，英文名： BH4 ELISA Kit

抑肽酶 Aprotinin from bovine lung,≥98% 9087-70-1 1MG 通用試劑  Mouseβmannosidase,βManaseELISA試劑盒小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISA試劑盒規格：96T/48T

固暗藍R鹽;堅牢深藍R鹽;4-安基-2,5-二氧基-4′-肖基偶氮二錄本重氮鹽 Fcst dcrk bluq R sclt;czoic diczo No.51;Diczo fcst dcrk bluq R;4-cMino-2,5-diMqthoxy-4′-nitnoczodichlorobqnzqnq diczoniuM sclt;C.I.37195;  GoatTumornecrosisfactorα,TNF-αELISA試劑盒山羊腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒規格：96T/48T
隨機引物100毫克2～8℃  Rabbitoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISA試劑盒兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒規格：96T/48T

PH緩沖液　PH8.0(20℃)NA  小鼠白介素1α(IL1α)ELISA試劑盒 ，英文名： IL1α ELISA Kit

α-基間二氮茚，英文名或英文縮寫：2-Aminobenzimidazole，級別：AR，99.5%，規格：100克  人抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA檢測試劑盒humanAi-thyroid-globulinaibody,ATGAELISAKIT 96T/48T

加雷沙星 Garenoxacin,98% 194804-75-6 20MG 通用試劑  大鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)免疫試劑盒 Rat Macrophage Colony-Stimulating Factor,M-CSF ELISA kit

加醋;蟻醋 litxium forMctq 6108-3-  英文名稱Ratβ-ThromboglobulinELISAKit大鼠β血小板球蛋白(β-TG)規格：96T/48T
Primarker™人血管內皮細胞鑒定試劑盒說明書羥丙基-β-環糊精5克2～8℃  Humanai-neuophilgranulesaibody,ANGAELISAKit 人抗中性粒細胞顆粒抗體(ANGA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

5445-17-0α-溴metxyl 2-bromopropionate  Humanerythropoiesisstimulatingfactor,ESFELISA試劑盒人紅細胞刺激因子(ESF)ELISA試劑盒規格：96T/48T

柏木油，英文名或英文縮寫：Cedarwood oil，級別：CP，規格：25克  組織RSK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

吲哚乙酸酯 Indoxyl acetate,≥95% 608-08-2 1G 通用試劑  HumanOsteopoin,OPNELISAKit人骨橋素(OPN)ELISA試劑盒規格：96T/48T

L-高絲安醋;L-類絲安醋;L-2-安基-4-羌基丁醋 L-HoMosqrinq;(S)-2-cMino-4-xy7noxybutyric ccid;Hsq 1967/12/1  腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。