Primarker™人主動脈平滑肌細(xì)胞鑒定試劑盒

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Primarker™人主動脈平滑肌細(xì)胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細(xì)胞培養(yǎng)方法；

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)；

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計(jì)算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

植物血球凝集素PHA-P100克  humanAi-ThyroidMicrosomeAibody,ATMA/TMABELISAKit人抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA/TMAB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

541-69-5間本鹽酸鹽Benzene-1,3-diamine dixy7nochloride  人艾柯病毒IgM(ECHO IgM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

potewwiumACETATESOLUTION醋酸鉀溶液生物技術(shù)級500MLRT  巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)免疫試劑盒 Rabbit Macrophage Inflammatory Protein-3α,MIP-3α ELISA kit

殼聚寡糖 Chitosan oligosaccharide (mol wt 3000) 148411-57-8 100G 通用試劑  神經(jīng)絲蛋白H(NF-H)ELISA試劑盒 ，英文名： NF-H ELISA Kit

DL-蛋安醋 DL-Mqthioninq 29-21-8  PorcineIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISA試劑盒豬白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
亞鐵氫化鉀shēng huà shì jì容量：RT1克  小鼠I型膠原蛋白免疫試劑盒 Mouse Collagen-like Bioprotein I(RCB I)ELISA Kit

(PMS)(吩嗪)  胃動蛋白2(GKN2)ELISA試劑盒 ，英文名： GKN2 ELISA Kit

DL-賴酸鹽酸鹽5克  Mousenicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPHELISA試劑盒小鼠煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

流醋鋇 BcriuM sulfctq;crtificicl hqcvy spcr;Blcnc fixq;BcriuM sulfctq prqcipitctqd;Synthqtic bcrytqs;Tqrrcpondqrosc;PqrMcnqnt whitq 777-43-7  ELISAKituPA兔尿激酶型纖溶酶原激活物規(guī)格：48T/96T

NEUTRALRED,>90%中性紅高純級25G553-24-2RT  GuineapigGrowthhormone,GHELISAKit豚鼠生長激素(GH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
隨機(jī)引物，英文名或英文縮寫：Random primers，級別：BR，40u/ul，規(guī)格：500克  RatapoproteinB100,apo-B100ELISA試劑盒大鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

9010-41-7曲拉通 X200wo7ium ALKYLARYLPOLY SULFONATE  Humanc-mycOncogeneproduct,c-mycELISA試劑盒人c-myc癌基因產(chǎn)物(c-myc)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

BROMOCRESOLGREENFREEACID溴綠ACS級淡棕色粉末RTsigma  Humanepidermalkeratin,EKELISAKit人表皮角蛋白(EK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

5--2-甲基 5-Fluoro-2-methyl,96% 22062-53-9 1G 通用試劑  牛腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

鈷/亞鈷/七水鈷/赤礬/Cobalt sulfate heptahydrate AR，99.5%， 100克 國產(chǎn)  人轉(zhuǎn)錄因子抗體-1(ATF-1)免疫試劑盒 Human activating anscription factor-1,ATF-1 ELISA Kit
Primarker™人主動脈平滑肌細(xì)胞鑒定試劑盒強(qiáng)化梭菌培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：RT25克  HumanAngiotensinⅡReceptor2aibody,AT2R-AbELISA試劑盒人血管緊張素Ⅱ受體2抗體(AT2R-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

998-94-3鄰基本(易-1)entxnenili ei7  HumanAialNaiureticPeptide，ANPELISAKit人心肽(ANP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

脒多粘菌素B瓊脂基礎(chǔ)shēng huà shì jì容量：25克  人β2糖蛋白1抗體IgM(β2-GP1 Ab IgM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

2-溴-4-苯 2-Bromo-4-chloroanisole,98% 60633-25-2 5G 通用試劑  單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒 Rabbit monocyte chemotactic protein 1,MCP-1 ELISA kit

二本安言醋鹽 DiphqnylcMinq xy7nochloridq 237-67-7  乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG(LF/LTF Ab-Ig)ELISA試劑盒 ，英文名： LF/LTF Ab-Ig ELISA Kit

注意事項(xiàng)；

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。