人淋巴成纖維細(xì)胞提取物培養(yǎng)

人淋巴成纖維細(xì)胞提取物【Human Lymph :Normal Lymphatic Fibroblast Derivatives】

人淋巴成纖維細(xì)胞提取物是從人淋巴成纖維細(xì)胞提取的，人淋巴成纖維細(xì)胞從正常人淋巴組織制備。正常人淋巴組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

疫苗效果免疫評(píng)價(jià)試劑盒（蛋白芯片法）盒Senkyunolide G9455洋川芎內(nèi)酯G

HLA-AB基因分型試劑盒（基因芯片法）盒Senkyunolide E9453

呼吸道常見病毒檢測試劑盒（基因芯片法）盒Senkyunolide C916528洋川芎內(nèi)酯C

呼吸道細(xì)菌核酸檢測試劑盒（基因芯片法）盒Schleicheol 22564458

腸道常見致病病毒檢測試劑盒（基因芯片法）盒Schleicheol 12564456
Otophylloside B 4'''-O-β-D-oleandropyranoside  中文名：  分子式：C56H90O19  度：97.0%  兔p物質(zhì)(SP)ELISAKit               

Withaphysalin E  中文名：  分子式：C28H34O7  度：97.0%  兔細(xì)胞粘附分子-1(rabbit VCAM-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Withaphysalin S  中文名：  分子式：C29H40O8  度：98.0%  兔內(nèi)皮生長因子(rabbit VEGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Physaminimin C  中文名：  分子式：C28H38O8  度：98.0%  兔性血友病因子(rabbit VWF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

價(jià)格：￥4,300 / 5 mg  別名：  性狀：Powder  關(guān)鍵詞：  兔軟骨糖蛋白39(rabbit YKL-40)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝
油酸（標(biāo)準(zhǔn)品）   Oleic acid  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC) 牛窖蛋白Caveolin-1(CAV1)試劑盒 Bovine Caveolin-1,CAV1 ELISA kit

反式-9-十八烯酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  trans-9-Octadecenoic methyl ester  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 牛結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA檢測試劑盒BovineHaptoglobin,Hpt/HPELISAKIT 96T/48T

對(duì)位紅（標(biāo)準(zhǔn)品）   Para Red  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于食品分析 牛結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)試劑盒 Bovine Haptoglobin,Hpt/HP ELISA KIT

巖芹酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Petroselinic acid  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC) 牛結(jié)核桿菌(MTB)抗體(IgG)試劑盒 Bovine mycobecterium tuberculosis(MTB)aibody IgG ELISA Kit

D-泛醇（標(biāo)準(zhǔn)品）  D-Panthenol  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 牛結(jié)核桿菌(MTB)抗體(IgM)試劑盒 Bovine mycobecterium tuberculosis(MTB)aibody IgM ELISA kit

糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00mg/mL,基體：水）  Saccharin  salt solution  質(zhì)量規(guī)格：1.00mg/mL,基體：水 牛金屬硫蛋白(MT)ELISA檢測試劑盒BovineMetallothionein,MTELISAKit 96T/48T

桃醛（標(biāo)準(zhǔn)品）  γ-Undecanolactone  質(zhì)量規(guī)格：0.96 牛金屬硫蛋白(MT)試劑盒 Bovine Metallothionein,MT ELISA Kit

甲基壬基甲酮（標(biāo)準(zhǔn)品）  2-Undecanone  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 牛可溶性CD8(sCD8)試劑盒 Bovine soluble cluster of differeiation 8,sCD8 ELISA Kit

2′-脫氧胞苷 鹽酸鹽  2′-Deoxycytidine hydrochloride  質(zhì)量規(guī)格：0.99 牛可溶性CD86(B7-2/sCD86)試劑盒 Bovine soluble Cluster of differeiation 86,sCD86 ELISA Kit

氫二銨  Ammonium phosphatedi basic  質(zhì)量規(guī)格：SP 牛口蹄疫(FMDV)抗體(IgM)試劑盒 Bovine aibody against Foot and Moh Disease(FMDV)IgM ELISA Kit
人淋巴成纖維細(xì)胞提取物培養(yǎng)Sulfamonomethoxine  1220-83-3  中文名：磺胺間甲氧嘧啶  分子式：C11H12N4O3S    兔白細(xì)胞介素35elisa試劑盒   兔白細(xì)胞介素35試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔白細(xì)胞介素35試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔白細(xì)胞介素35試劑盒、兔白細(xì)胞介素35 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Sulfamonomethoxine   38006-08-5  中文名：磺胺間甲氧嘧啶鈉  分子式：C11H11N4NaO3S    兔白細(xì)胞介素1elisa試劑盒   兔白細(xì)胞介素1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔白細(xì)胞介素1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔白細(xì)胞介素1試劑盒、兔白細(xì)胞介素1elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Lincomycin  154-21-2  中文名：林可霉素  分子式：C18H34N2O6S    兔白細(xì)胞介素15elisa試劑盒   兔白細(xì)胞介素15試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔白細(xì)胞介素15試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔白細(xì)胞介素15試劑盒、兔白細(xì)胞介素15elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Doxycycline  564-25-0  中文名：多西環(huán)素  分子式：C22H24N2O8    兔白介素17elisa試劑盒   兔白介素17試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔白介素17試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔白介素17試劑盒、兔白介素17 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Axitinib  319460-85-0  中文名：阿西替尼  分子式：C22H18N4OS    兔8-異構(gòu)前列腺素elisa試劑盒   兔8-異構(gòu)前列腺素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔8-異構(gòu)前列腺素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔8-異構(gòu)前列腺素試劑盒、兔8-異構(gòu)前列腺素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

 運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。