PrimaCell™小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞試劑盒說(shuō)明書(shū)

PrimaCell™小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

化大鼠腎上腺髓質(zhì)素(AM)基因重組表達(dá)載體(pGEFP-AM)10微克  64849-39-4甜葉懸鉤子苷說(shuō)明書(shū)  Rubusoside

RatHistoneDeacetylase,HDELISA試劑盒大鼠組織蛋白去乙?；?/span>(HD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  20137-37-5鐵冬青酸品牌  Rutundicacid 

小鼠脂多糖/內(nèi)(LPS)ELISA試劑盒 ，英文名： LPS ELISA Kit  191729-45-0通關(guān)藤苷H規(guī)格  Tenacissoside H

小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit 96T/48T  928151-78-4通關(guān)藤苷F  Tenacissoside F

人巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)試劑盒 Human MIF ELISA Kit  191729-44-9通關(guān)藤苷I說(shuō)明書(shū)  Tenacissoside I
37271-16-2番瀉苷C  Sennoside C   載玻片細(xì)胞P16蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

36948-76-2千層紙素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷  Oroxyloside   載玻片細(xì)胞P16蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

3681-99-0葛根素品牌  Puerarin   載玻片細(xì)胞NFKAPPABP65蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

3681-99-0葛根素  Puerarin   載玻片細(xì)胞NFKAPPABP50蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20

3681-93-4牡荊素品牌  Vitexin  載玻片細(xì)胞NFKAPPABP50蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20
小鼠16α羥基雌酮1(16-αOHE-1)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouse16-αHydroxyesogen1,16-αOHE-1ELISAKit 96T/48T  518-17-2吳茱萸堿  Evodiamine

人巨噬細(xì)胞炎性蛋白5(MIP-5)試劑盒 Human MIP-5 ELISA Kit  84-26-4吳茱萸堿說(shuō)明書(shū)  Rutecarpine

Ratadvancedglycationendproducts,AGEsELISAKit大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  7432-28-2五味子醇甲品牌  Schisandrin

載玻片細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20  58546-54-6五味子醇乙規(guī)格  Schisandrol B

Mouse5-Hydroxyyptamine,5HTELISA試劑盒小鼠5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  61281-38-7五味子甲素  schisandrin A
PrimaCell™小鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞試劑盒說(shuō)明書(shū)519-02-8苦參堿規(guī)格  Matrine  植物總氨基酸含量比色法定量檢測(cè)試劑盒20

518-82-1大黃素說(shuō)明書(shū)  Emodin   植物總RNA化試劑盒(高多糖/酚)20

518-69-4延胡索甲素說(shuō)明書(shū)  （+）- Corydaline   植物總RNA化試劑盒(低多糖/酚)20

518-69-4延胡索甲素品牌  Corydaline  植物種子甲磺酸乙脂突變誘導(dǎo)試劑盒3

518-34-3粉防己堿  Tetrandrine   植物種子活性葉綠體分離試劑盒20

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。