細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1)豹貓肌肉成纖維樣細胞;LCM4說明書準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。 二.細胞處理: 1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。 對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法: 方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨,超低比價,豹貓肌肉成纖維樣細胞;LCM4說明書貨期短,價格優(yōu),售后齊全。點擊進入了解更多其它源細胞。 產(chǎn)品描述: 細胞名稱 豹貓肌肉成纖維樣細胞;LCM4說明書 形態(tài)特性成纖維細胞樣 生長特性貼壁生長 特征特性該細胞系來源于一雄性豹貓的肌肉組織。2004年由中國科學(xué)院昆明細胞庫建立。 培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)20%NBS 傳代方法1:2傳代;3-4天一次 傳代情況P3 凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS 支原體檢測熒光法(-) STR- 同工酶 染色體
注意事項: ?1.一般客戶拿到豹貓肌肉成纖維樣細胞;LCM4說明書后,應(yīng)該注意什么? 客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。 收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。 細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些? (1)客戶造成細胞污染,不重發(fā); (2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (3)非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); (4)細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā); (5)細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā); (6)細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā); (7)視具體情況而定。 HUM, 正常人主動脈平滑肌細胞 SIRPG Others Cynomolgus 食蟹猴 SIRPG / SIRP gamma / CD172g 人細胞裂解液 (陽性對照) 人正常肺上皮細胞;BEAS-2B 769-P細胞,人腎癌細胞系(769-P) 中國倉鼠倉鼠肺細胞,R1610細胞 CL-0406NCI-H838(人非小細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×2 CW-2(人結(jié)腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2 hMNC-PB-c single donorula-pure 外周血來源的人類單核細胞 人髓核細胞HNPC 豹貓肌肉成纖維樣細胞;LCM4說明書猴抗肝細胞膜抗體(LMA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 人一氧化氮(NO)免疫試劑盒 Human niic oxide,NO ELISA Kit 人抗軟骨抗體(ai-cailage-Ab)ELISA試劑盒 ,英文名: ai-cailage-Ab ELISA Kit Ratheatshockprotein20,hSP-20ELISA試劑盒大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T HumanFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISA試劑盒人凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T HumanImmuneRNA,IrnaELISAKit人免疫核糖核酸(Irna)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 冷凍保存細胞之方法: 豹貓肌肉成纖維樣細胞;LCM4說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。 冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |