人子宮成纖維細胞提取物培養

人子宮成纖維細胞提取物【Human Uterine: Normal Uterine Fibroblast Derivatives】

人子宮成纖維細胞提取物是從人子宮成纖維細胞提取的，人子宮成纖維細胞從正常人子宮組織制備。正常人子宮組織采集自各地方醫院，采集工作根據IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

移液管7-Anilino-hydroxy-naphthalenesulfonic acid117-苯胺基-羥基-萘磺酸

移液器架Benzanilide938苯甲酰苯胺

櫻花記號筆 紫色Benzoin1193安息香

熒光定量封板膜張/盒 張/盒 0張/盒3-Benzalphthalide57513-亞芐基苯酞

載玻片片/盒L-Aspartic acid564L-天門冬氨酸
Ophiopogonin D  中文名：麥冬皂苷D  分子式：C44H70O16  度：%  兔子白介素2elisa試劑盒   兔子白介素2試劑盒   規格型號：96T/48T   兔子白介素2試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子白介素2試劑盒、兔子白介素2elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

β-Sitosterol  中文名：β-谷甾醇  分子式：C29H50O  度：98.0%  人α2巨球蛋白elisa試劑盒   人α2巨球蛋白試劑盒   規格型號：96T/48T   人α2巨球蛋白試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人α2巨球蛋白試劑盒、人α2巨球蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  

Thevetin B  中文名：  分子式：C42H66O18  度：97.5%  兔內皮型合成酶(eNOS)ELISAKit  

6,7-Dihydroneridienone A  中文名：  分子式：C21H28O3  度：%  兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISAKit  

Dregeoside A11  中文名：  分子式：C55H88O22  度：%  兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISAKit
硬脂酸鎂  Magnesium stearate  質量規格：BR 甲基纖維素細胞克隆試劑盒10/50/80

孔雀石綠鹽酸鹽(>90%,BS)  Malachite green hydrochloride  質量規格：>90%,BS 甲萘醌溶液(1毫摩爾)50毫升

無水硫酸錳(>98%,BR)  Manganese (II )sulfate anhydrous  質量規格：>98%,BR 甲紫(cresylviolet)復染試劑盒50

丙硫異煙胺  Prothionamide  質量規格：>98.5%,BR 簡單細菌酚品紅染色試劑盒50

丙硫異煙胺(標準品)  Prothionamide  質量規格：>98%,標準品 簡單細菌甲基藍染色試劑盒50

重水,氧化氘(0.55ml*10)  Deuterium Oxide  質量規格：D,99.9% 簡單細菌結晶紫染色試劑盒50

重水,氧化氘(0.6ml*10)  Deuterium Oxide  質量規格：D,99.9% 簡易化學法冰凍切片抗原修復處理試劑盒50

重水,氧化氘(0.6ml*10)  Deuterium Oxide  質量規格：D,99.96% 簡易化學法石蠟切片抗原修復處理試劑盒50

重水,氧化氘(10G)  Deuterium Oxide  質量規格：D,99.96% 膠原蛋白酶消化試劑盒20毫升

重水,氧化氘(25G)  Deuterium Oxide  質量規格：D,99.9% 膠原酶I(CollagenaseI)ELISA檢測試劑盒MonkeyCollagenaseIELISAKit 96T/48T
人子宮成纖維細胞提取物培養Tanshinone IIB  17397-93-2  中文名：丹參酮IIB  分子式：C19H18O4  度：97.0%  關鍵詞：  神經保護; 抗氧化; 丹參; 鼠尾草屬; 二萜醌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠胰島素原(PI)ELISA試劑盒  

Tanshinone IIA  568-72-9  中文名：丹參酮IIA  分子式：C19H18O3  度：98.5%  關鍵詞：  抗腫瘤; 抗癌; 丹參; 二萜醌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒           

Tanshinone I  568-73-0  中文名：  分子式：C18H12O3  度：96.0%  關鍵詞：  抗腫瘤; 抗癌; 鼠尾草屬; 二萜醌; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白6(IGFBP-6)ELISAKit  

Sunitinib malate  341031-54-7  中文名：蘋果酸舒尼替尼  分子式：C26H33FN4O7  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠巨噬細胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISAKit  

Sulfaquinoxaline  59-40-5  中文名：磺胺喹噁啉  分子式：C14H12N4O2S  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠肺部活化調節趨化因子(PARC/CCL18)ELISAKit

 運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。