PrimaCell™人前列腺上皮細(xì)胞試劑盒說(shuō)明書

PrimaCell™人前列腺上皮細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運(yùn)輸和保存；

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

英文名稱Mouse6-keto-prostaglandinelisakit小鼠6-同-前列腺素(6-keto-prostaglandin)規(guī)格：96T/48T  6989-21-5蒼術(shù)酮  Atractylon

茶葉維生素U(S-Methylmine)比色法定量檢測(cè)試劑盒20  107668-79-1草烏甲素說(shuō)明書  Bulleyaconitine A

Ratfreechorionicgonadoopin,f-βCGELISA試劑盒大鼠游離β絨毛膜促性腺激素(f-βCG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  28808-62-0梣酮品牌  Fraxinellone

小鼠組蛋白脫乙酰基酶1(HDAC1)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC1 ELISA Kit  查斯曼林規(guī)格  Chasmanine

山羊白介素10(IL-10)ELISA檢測(cè)試劑盒GoatIerleukin10,IL-10ELISAKit 96T/48T  482-45-1異歐前胡素  Isoimperatorin
84605-18-5環(huán)黃芪醇說(shuō)明書  Cycloastragenol   組織HPV7(HUMANPAPILLOMAVIRUS-7)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20

84272-85-55-O-甲基維斯阿米醇苷說(shuō)明書  5-O-Methylvisammioside   組織HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20

84-26-4吳茱萸堿說(shuō)明書  Rutecarpine  組織HHV6-B(HUMANHERPESVIRUS6-B)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20

84104-71-2雷公藤內(nèi)酯甲別名：規(guī)格  Wilforlide A   組織HHV6-A(HUMANHERPESVIRUS6-A)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20

83-95-4茵芋堿說(shuō)明書  Skimmianine  組織HHV6(HUMANHERPESVIRUS6)病毒定性檢測(cè)試劑盒20
Ratglucocoicoidreceptor,GRELISA試劑盒大鼠糖皮質(zhì)類受體(GR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  13657-68-6莪術(shù)二酮品牌   Curdione

小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒 ，英文名： TFR/CD71 ELISA Kit  17910-09-7莪術(shù)烯規(guī)格  Curzerene

小鼠心肌營(yíng)養(yǎng)素1(CT-1)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousecardioophln1,CT-1ELISAKit 96T/48T  474-25-9鵝去氧膽酸   Chenodeoxycholic acid 

人抗α干擾素抗體(IFNα-Ab)試劑盒 Human IerferonαAibody,IFNα-Ab ELISA Kit  474-25-9鵝去氧膽酸說(shuō)明書   Chenodeoxycholic acid 

Rabbiturokinaseplasminogenactivator,uPAELISAKit兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  516-35-8牛磺鵝去氧膽酸品牌   Taurochenodeoxycholic acid
PrimaCell™人前列腺上皮細(xì)胞試劑盒說(shuō)明書143-67-9硫酸長(zhǎng)春堿品牌  Vinblastine sulfate   英文名稱RatHeatShockProtein20ELISAKit大鼠熱休克蛋白20(HSP20)規(guī)格：96T/48T

142998-47-8丹酚酸D說(shuō)明書  Salvianolic acid D   英文名稱RatHCYELISAKit大鼠同型半胱氨(HCY)規(guī)格：96T/48T

142998-47-8丹酚酸D品牌  Salvianolic acid D   英文名稱RatHCGELISAKit大鼠絨毛促性腺激素(HCG)規(guī)格：96T/48T

1429-30-7氯化矮牽牛素規(guī)格  Petunidin Chloride    英文名稱RatHCGELISAKit大鼠絨毛促性腺激素(HCG)規(guī)格：96T/48T

14259-55-3去乙酰基車葉草苷酸說(shuō)明書  Desacetyl asperulosidic acid   英文名稱RatHbA1cELISAKit大鼠糖化血紅蛋白(HbA1c)規(guī)格：96T/48T