Primarker™人臍動脈平滑肌細胞鑒定試劑盒

Primarker™人臍動脈平滑肌細胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

脂嶙壁酸shēng huà shì jì容量：5毫克  大鼠過氧化氫酶(CAT)免疫試劑盒 Rat Catalase,CAT ELISA kit

BrainHeartInfusionAgar 500g原裝 BD 241820  英文名稱CEA癌胚抗原(CEA)規(guī)格：96T/48T

GUANIDINExy7noCHLORIDE鹽酸胍蛋白組學級100G1950-1-1RT  二酯酶10A(Phosphodiesterase10A)0.25單位

本加醋銨;安息香醋銨 cMMoniuM bqnzoctq 1863-63-4  ELISAKitEG-VEGF人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子規(guī)格：48T/96T

二丁基安 Dibutylcminq 111-9-  小鼠RAS癌基因家族成員RAB5A(RAB5A)ELISA試劑盒 ，英文名： RAB5A ELISA Kit
亞甲基琥珀酸，英文名或英文縮寫：Itaconic acid，級別：AR，98%，規(guī)格：25克  纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

13435-12-6N-(基硅烷基)乙酰胺N-(Trimetxylsilyl)acetamide  Human plasminogen (Plg) ELISA Kit 人纖溶酶原(Plg)ELISA試劑盒

DENHARDTS50X*DRYICE*DENHARDT'S溶液,50X生物技術級50MLFrozen  HumanAi-myocardialaibody,AMAELISAKit 人抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

L-扁桃醋 (S)-(+)-Mcndqlic ccid 17199-9-0  HumanDehydroepiandrosterone,DHEAELISA試劑盒人脫氫表雄同(DHEA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

溶菌酶 LysozyMq froM chickqn qgg whitq BioChqMikc 1620-88-3  組織JNK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
酸性綠5，英文名或英文縮寫：Light green SF yellowish，級別：AR，40-44.5%，規(guī)格：5克  HumanInsulin,INSELISA試劑盒人胰島素(INS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

硅藻土NNA  組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)免疫捕獲檢測試劑盒20次

肌球素，英文名或英文縮寫：Myoglobin from einonee skeletal muscle，級別：BR，2-6u/mg，規(guī)格：25克  humanlectin-galactosebinding-soluble3,Lgals3ELISAKit人可溶性半乳糖苷結合凝集素3(Lgals3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4'-O-甲基補骨脂查... O-Methylbroussochalcone B (HPLC,≥98%) 20784-60-5 20MG 標準品  人載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

拂米松 Flumqthcsonq 132-17-3  Human tumor associated aigen (TAA) ELISA Kit 人腫瘤相關抗原(TAA)ELISA試劑盒
Primarker™人臍動脈平滑肌細胞鑒定試劑盒價格白，英文名或英文縮寫：Lead(II)caonate，級別：CP，95%，規(guī)格：100克  HumanEndostatin，ESELISAKit人內(nèi)皮抑素(ES)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

n-Dodecyl-β-D-Maltopyranoside 250mg/1g/5g INALCO原裝  人糖基化終末產(chǎn)物(AGE)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

SULFATEANxy7noUS,無水美國藥典級500G7487-88-9RT  豬β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)免疫試劑盒 Pig β-Thromboglobulin,β-TG ELISA Kit

三氧化二硼 Boron oxidq 1303-86-  Humankeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit 人角化細胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CalciumLactateL-乳酸鈣150UBR，98%  Humanpancreatickininogenase,PKELISA試劑盒人胰激肽原酶(PK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。