人臍動脈平滑肌細胞培養

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人臍動脈平滑肌細胞【Human Umbilical Cord：Normal Umbilical Cord Aortic Smooth Muscle Cells】
       產品描述：公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。細胞的培養采用公司PrimaCellTM原代細胞培養試劑盒來優化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時的穩定。在公司部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態，進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。

細胞培養方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數。

指示選擇性培養基基礎10克保存：-20℃  小鼠25羥基膽固醇(25-OHC)ELISA試劑盒 ，英文名： 25-OHC ELISA Kit

20769-85-12-溴-2-甲基2-Bromo-2-metxylpropionyl bromide  牛甘膽酸(CG)ELISA檢測試劑盒Bovinecholyglycine,CGELISAKit 96T/48T

酸鉀shēng huà shì jì容量：1克  人B群鏈球菌多糖抗體(IgG)免疫試劑盒 Human Ai-Group B Septococcal Type III Capsular Aibody IgG ELISA Kit

2，3-二基丁烷　標準品 2,3-DIMqTHYLBUTcNq 1979/9/8  英文名稱MouseEGFELISAKit小鼠表皮生長因子(EGF)規格：96T/48T

碳酸銅shēng huà shì jì容量：RT5克  冰凍切片脂肪酸費斯克勒(Fischler)染色試劑盒50次
辛酸乙酯，英文名或英文縮寫：etxyl octanoate，級別：CP，98%，規格：500克  Human26Sproteasome,26SPSMELISA試劑盒人26S蛋白酶體(26SPSM)ELISA試劑盒規格：96T/48T

51005-14-2肌紅蛋白 ≥90% (-20℃)ACTIN FROM RABBIT MUSCLE  Humanai-myelinaibodyIgA,AMAIgAELISAKit人抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體(MCV)ELISA試劑盒規格：96T/48T

曲拉通x-405，英文名或英文縮寫：Triton x-405，級別：色固，規格：1克  人白介素受體相關激酶(IRAK)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

赤芝酸LM1 Lucidenic acid LM1 (HPLC,≥98%) 364622-33-3 10MG 通用試劑  兔子生長激素(GH)免疫試劑盒 Rabbit Growth Hormone,GH ELISA Kit

催化劑 DOYLq DIRHODIUM CcTcLYST-RH2(4S-MqOX)4 863973-63-2  生長相關蛋白43(GAP-43)ELISA試劑盒 ，英文名： GAP-43 ELISA Kit
十二烷shēng huà shì jì容量：1克  Human cytovillin / Ezrin protein (cytovillin/ezrin) ELISA Kit 人細胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(cytovillin/ezrin)ELISA試劑盒

Poly-L-Lysine 25mg/100mg/1g原裝 Sigma P2636  HumanSS-A/RoaibodyELISAKit 人抗SS-A/Ro抗體ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

γ-球蛋白(牛)100克  HumanCyclin-dependekinase4,CDK-4ELISA試劑盒人周期素依賴性激酶4(CDK-4)ELISA試劑盒規格：96T/48T

6-流鳥嘌呤 6-Thiogucninq 124-4-7  組織GRK5激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

BETAINExy7noCHLORIDE甜菜堿超純級  Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit人抗多發性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒規格：96T/48T
人臍動脈平滑肌細胞培養末端轉移酶shēng huà shì jì容量：500毫克  小鼠BH3相互作用域死亡激動劑(Bid)ELISA試劑盒 ，英文名： Bid ELISA Kit

CollagenIV 1g Worthington原裝  人骨退化特異標志物(CTX-2)ELISA檢測試劑盒HumanCTX-2ELISAKit 96T/48T

N-壬酰基-N-甲基葡萄糖胺100克  大鼠鈣激活中性蛋白酶1(CAPN1)免疫試劑盒 Rat calpain 1,CAPN1 ELISA Kit

減性藍6B cLKcLI BLUq 6B 8004-90-8  CLIAKitforvaspin(MouseVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor)ELISAKit小鼠內臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑規格：48T/96T

青醋;青基醋;青基醋醋 Cycnoccqtic ccid;Mclonic Mononitnilq 1937/9/8  膜電位依賴性純化線粒體氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒20次

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。