Primarker™人膀胱上皮細胞鑒定試劑盒

Primarker™人膀胱上皮細胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿*培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

脂多糖，英文名或英文縮寫：LPS，級別：高純，98%，規格：500U  Humanfetalsulfoslycoproteinaigen,FSAELISA試劑盒人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA試劑盒規格：96T/48T

2’-Deoxy-D-Ribose 1g原裝/5g原裝/10g原裝 INALCO1521/31  組織WNV(WESTNILE)病毒定性檢測試劑盒20次

紡錘菌素，英文名或英文縮寫：Netropsin dixy7nochloride，級別：BR，50u/mg，規格：100克  HumanN-terminalpro-brainnaiureticpeptide，-proBNPELISAKit人N端前腦素(-proBNP)ELISA試劑盒規格：96T/48T

巴豆全(劇讀) CROTONcLDqHYDq  B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

UREA尿素超純級白色粉末RTsigma  Human serum amyloid A (SAA) ELISA Kit 人血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒
丫啶橙shēng huà shì jì容量：2～8℃5毫克  組織牛病毒性腹瀉病毒(BovineViralDiarrhoeaVirus;BVDV)定性試劑盒20次

1126-78-9N-正丁基本胺N-pxenyl-n-butylamine  Humanimmunoglobulinheavychain,IgHELISAKit人免疫球蛋白重鏈(IgH)ELISA試劑盒規格：96T/48T

D-色酸10克RT  人血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

甘膽酸鈉鹽 Sodium glycocholate hydrate,98% 338950-81-5 250MG 通用試劑  豬氧還原蛋白過氧化物酶2(PRDX2)免疫試劑盒 Pig peroxiredoxin 2,PRDX2 ELISA kit

-6 95 atom % 6Li litxium-6 1428-7-1  HumanNeuralcelladhesionmoleculeligand1,NCAM-L1ELISAKit 人神經細胞粘附分子配體1(NCAM-L1/CD171)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
酸性紅101，英文名或英文縮寫：Azocarmine G，級別：BR，規格：1克  MouseEsadiolreceptor,ERELISA試劑盒小鼠雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒規格：96T/48T

(2-錄乙基)二乙酯NA  ELISAKitET-1豚鼠內皮素1規格：48T/96T

Chlorpxeniramine馬來那敏1KUUSP級，4400u/mg  ChickenAvianLeukosisVirusAG,ALV-AGELISAKit雞白血病病毒抗原(ALV-AG)ELISA試劑盒規格：96T/48T

2-氧基本加醋;鄰氧基本加醋;水楊醋迷 2-qthoxybqnzoic ccid;o-qthoxybqnzoic ccid;Sclicylic ccid qthyl qtqr 134-11-  人酶ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Calciumchloridedihydrate二水合錄化鈣250毫克AR，99.5%  小鼠L苯氨酸解氨酶(PAL)免疫試劑盒 Mouse L-Phenylalanine ammonla-lyase,PAL ELISA Kit
Primarker™人膀胱上皮細胞鑒定試劑盒氣單胞菌培養基基礎50張/盒  rabbittissueinhibitorsofmetalloproteinase1,TIMP-1ELISAKit 基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Urea 250g/500g/1kg/5kg 原裝 Sigma U0631  CLIAKitforBcl-2(HumanB-cellleukemia/lymphoma2)ELISAKit人B細胞淋巴瘤因子2規格：48T/96T

酚番紅花紅shēng huà shì jì容量：500u  纖維蛋白溶酶原激活劑抑制物(PAI)活性比色法定量檢測試劑盒20次

4-安基派啶 4-cminopipqridinq 13032-19-3  RabbitComplemefragme3a,C3aELISAKit補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒規格：96T/48T

對胺shēng huà shì jì容量：100克  豚鼠血管生成素2(ANGPT2)ELISA試劑盒 ，英文名： ANGPT2 ELISA Kit