小鼠甲狀腺組織提取物培養(yǎng)

小鼠甲狀腺組織提取物【Thyroid: Normal Mouse Thyroid Derivatives】

小鼠甲狀腺位于頸部甲狀軟骨下方，氣管兩旁。甲狀腺的主要功能是合成甲狀腺激素，調(diào)節(jié)機(jī)體代謝。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍小鼠甲狀腺組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

GoodViewTM 核酸染料1mlConduritol A5267牛彌菜醇A

低電滲瓊脂糖 Agarose-LE0g5-Epilithospermoside847991

新型蛋白酶K Mutant Proteinase K0mgNeochlorogenic acid63新綠原酸

5-溴-氯-吲哚半乳糖苷 X-Gal1gFicaprenol 112629

尿素 Urea0gEthyl β-D-ribo-hex-ulopyranoside49538
Dehydroadynerigenin β-neritrioside  中文名：  分子式：C42H62O17  度：96.0%  兔血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISAKit  

11,12-Di-O-acetyltenacigenin B  中文名：  分子式：C25H36O7  度：98.5%  兔結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISAKit  

Tenacissoside I  中文名：通關(guān)藤苷I  分子式：C44H62O14  度：%  α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISAKit              

Stigmasta-4,25-dien-3-one  中文名：  分子式：C29H46O  度：%  兔可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)ELISA試劑盒  

Stigmasta-4,22,25-trien-3-one  中文名：  分子式：C29H44O  度：%  兔可溶性P選擇素（sP-selectin）ELISA試劑盒
七葉皂苷 Purity≥98% 20mg ELISAKitVIP人血管活性腸肽規(guī)格：48T/96T

七葉皂苷A HPLC≥98% 10mg ELISAKitVK1人維生素K1規(guī)格：48T/96T

七葉皂苷B HPLC≥98% 10mg ELISAKitVPI人血管活性肽酶抑制劑規(guī)格：48T/96T

七葉皂苷C HPLC≥95% 10mg ELISAKitVWF人血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子規(guī)格：48T/96T

七葉皂苷D HPLC≥95% 10mg ELISAKity-Ⅱ人胰蛋白酶原Ⅱ規(guī)格：48T/96T

七葉皂苷Iia HPLC≥98% 10mg ELISAKitypsin人胰蛋白酶規(guī)格：48T/96T

七葉皂苷IIb HPLC≥98% 10mg ELISAKit親環(huán)蛋白人肽酰脯氨酰異構(gòu)酶規(guī)格：48T/96T

七葉皂苷鈉 Purity≥98% 20mg ELISAKi人神經(jīng)降壓素規(guī)格：48T/96T

榿木酮 HPLC≥98% 20mg ELISA分析20樣本

漆黃素 HPLC≥98% 20mg ELISA*制備試劑盒10
小鼠甲狀腺組織提取物培養(yǎng)皮質(zhì)醇(Coisol)ELISA試劑盒     9,9-Bis(4-hydroxyphenyl)fluorene  3236-71-3  中文名：9,9-雙(4-羥苯基)芴  分子式：C25H18O2 

皮質(zhì)醇(Coisol)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  11,12-Di-O-acetyltenacigenin B  中文名：  分子式：C25H36O7  度：98.5%

皮質(zhì)elisa試劑盒   皮質(zhì)試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   皮質(zhì)試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：皮質(zhì)試劑盒、皮質(zhì)elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  9-Anthracenylmethyl acrylate  31645-34-8  中文名：丙烯酸-9-蒽甲酯  分子式：C18H14O2 

皮質(zhì)elisa試劑盒   皮質(zhì)試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   皮質(zhì)試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：皮質(zhì)試劑盒、皮質(zhì)elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  7-Amino-4-methylcoumarin  26093-31-2  中文名：7-氨基-4-甲基香豆素  分子式：C10H9NO2 

皮質(zhì)/上腺(CO)ELISA試劑盒     9,9-Bis(4-hydroxyphenyl)fluorene  3236-71-3  中文名：9,9-雙(4-羥苯基)芴  分子式：C25H18O2  度：98.0%

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。