PrimaCell™小鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞試劑盒

PrimaCell™小鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

小鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA檢測試劑盒MouseoponinⅠ,Tn-ⅠELISAKit 96T/48T  20554-84-1小白菊內(nèi)酯品牌  Parthenolide

人巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(MIP-2)試劑盒 Human macrophage inflammatory protein 2,MIP-2 ELISA Kit  15401-69-1小檗紅堿規(guī)格  Berberrubine

rataldosterone,ALDELISAKit大鼠固同(ALD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  2086-83-1小檗堿  Berberine

載玻片細(xì)胞βCOLLAGENII蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  18296-44-1纈草三酯說明書  valepotriate

Mouse6-keto-prostaglandin,6-K-PGELISA試劑盒小鼠6同前列腺素(6-K-PG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  31008-19-2辛夷脂素品牌  Fargesin
331-39-5咖啡酸品牌  Caffeic acid  雜交清洗液500毫升

33069-62-4紫杉醇規(guī)格  Taxol  遠(yuǎn)西方雜交(FARWESTERNBLOT)印跡消除試劑盒20

32981-86-510-脫乙酰基巴卡丁III  Deacetylbaccatin III   原生質(zhì)酵母細(xì)胞轉(zhuǎn)化試劑盒20

327-97-9綠原酸說明書  Chlorogenic acid  元素檢測樣品處理試劑盒20

32791-84-7人參三醇品牌  Panaxatriol  玉米樣品處理試劑盒20
小鼠抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA檢測試劑盒MousePerinuclearai-neuophilcytoplasmicaibody,pANCAELISAKit 96T/48T  4136-37-2鹽酸水蘇堿  Stachydrine

人巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)試劑盒 Human MIP-1α ELISA kit  590-46-5鹽酸甜菜堿說明書  Betaine

RatAlpha-fetoprotein,AFPELISAKit大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  6078-17-7鹽酸小檗胺品牌  Berbamine

載玻片細(xì)胞βRUNX3蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  141433-60-5鹽酸小檗堿規(guī)格  Berberine

Mouse8-isoprostaglandin,8-iso-PGELISA試劑盒小鼠8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  960383-96-4鹽酸藥根堿  Jatrorrhizine
PrimaCell™小鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞試劑盒53452-16-7王不留行黃酮苷說明書  Vaccarin  豬髓過氧化物酶(MPO)試劑盒 Pig Myeloperoxidase,MPO ELISA kit

53452-16-7王不留行黃酮苷規(guī)格  Vaccarin   豬髓1脂堿性蛋白(MBP)試劑盒 Porcine MBP ELISA Kit

531-75-9秦皮甲素說明書  Esculin  豬水通道蛋白4(AQP-4)試劑盒 Pig Aquaporin 4,AQP-4 ELISA Kit

531-44-2東莨菪苷品牌  Scopolin   豬水通道蛋白1(AQP-1)試劑盒 Pig Aquaporin 1,AQP-1 ELISA Kit

531-29-3松柏苷  Coniferin    豬雙氫(DHT)試劑盒 Pig Dihydrotestosterone,DHT ELISA Kit

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。