小鼠輸尿管組織提取物說明書

小鼠輸尿管組織提取物【Ureter: Normal Mouse Ureter Derivatives】

輸尿管上接腎盂，下連膀胱，是一對細長的管道，呈扁圓柱狀，功能是輸送尿液。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠輸尿管組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

Folic acid(葉酸)   5g1-Actamido,5-dimethyladmantane199827

G418   1g 1-Acetylpiperazine1388981-乙酰

GA3/赤霉素   1g/5g1-Acetyl-piperidinecarboxylic acid251-乙?；?/span>-甲酸

GDP 5’-二磷酸鳥苷二鈉   mg1-Acetoxy,17-octadecadiene2,14-diyne1,16-diol21355

GDP-mannose 鳥苷二磷酸甘露糖鈉鹽   mg /25mg 1'-Acetonaphthone94181'-萘乙酮
Daturataturin A aglycone  中文名：  分子式：C28H38O5    豬血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISAKit              

Daturataturin A  中文名：  分子式：C34H48O10    豬緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒  

Daturametelin I  中文名：  分子式：C34H48O10    豬辛型肝炎病毒（TTV）ELISA試劑盒  

D-Aspartic acid  中文名：D-天冬氨酸  分子式：C4H7NO4    豬心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA試劑盒  

Dasatinib  中文名：達沙替尼  分子式：C22H26ClN7O2S    豬纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA試劑盒
潑尼松  Prednisone  質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP30,BR VTGELISAKit鯉魚卵黃蛋白原(VTG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

潑尼松(標準品)  Prednisone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品 VTGELISA試劑盒鯉魚卵黃蛋白原規(guī)格：96T/48T

強力霉素堿/強力霉素一水合物  Doxycycline monohydrate/Doxycycline base  質(zhì)量規(guī)格：>900μg/mg,USP,BR,可用于細胞培養(yǎng) Wheatgermagglinin,WGAELISAKit麥胚凝集素/凝集蛋白(WGA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

唑來  Zoledronic acid hydrate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,一水化合物,BR Wheatgermagglinin,WGAELISA試劑盒麥胚凝集素/凝集蛋白(WGA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

唑來（標準品）  Zoledronic acid hydrate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品 α1微球蛋白(α1-MG)ELISA檢測試劑盒Monkeyα1-microglobulin,α1-MGELISAKit 96T/48T

帕米二鈉  Pamidronate Di  質(zhì)量規(guī)格：>99%,五水合物 α-bungarotoxin,α-BGTELISAKitα-銀環(huán)蛇(α-BGT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

帕米二鈉（標準品）  Pamidronate Di  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品 α-bungarotoxin,α-BGTELISA試劑盒α-銀環(huán)蛇(α-BGT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

硫酸慶大霉素  Gentamicin sulfate   質(zhì)量規(guī)格：>590IU/MG,BR 白介素1(IL-1)ELISA檢測試劑盒MonkeyIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T

硫酸慶大霉素(標準品)  Gentamicin sulfate   質(zhì)量規(guī)格：含量測定 白介素2受體(IL-2R)ELISA檢測試劑盒MonkeyIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit 96T/48T

頭孢呋辛鈉  Cefuroxime    質(zhì)量規(guī)格：>855ug/MG,USP30 白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA檢測試劑盒MonkeyIerleukin-8,IL-8ELISAKit 96T/48T
小鼠輸尿管組織提取物說明書球蛋白G(IgG)ELISAKit                 8-Phenyloctanoic acid  中文名：8-苯基辛酸  分子式：C14H20O2 

球蛋白G(IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  1,2-O-Isopropylidene-β-D-fructopyranose  中文名：  分子式：C9H16O6  度：98.5%

球蛋白Eelisa試劑盒   球蛋白E試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   球蛋白E試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：球蛋白E試劑盒、球蛋白E elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  8-Hydroxyodoroside A  176519-75-8  中文名：  分子式：C30H46O8 

球蛋白Eelisa試劑盒   球蛋白E試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   球蛋白E試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：球蛋白E試劑盒、球蛋白E elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  8-Hydroxyhyperforin 8,1-hemiacetal  59014-02-7  中文名：  分子式：C35H52O5 

球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒     8-Hydroxyodoroside A  中文名：  分子式：C30H46O8  度：96.0%

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。