宮頸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物培養(yǎng)

宮頸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物【Human Cervix MatchPair: Normal Cervix Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】

人宮頸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物是從人宮頸上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中提取的，人宮頸上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分別從正常人宮頸組織和腫瘤組織中制備。正常人宮頸組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運(yùn)輸和保存：

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

腸道病毒(EV-U)實(shí)時熒光PCR檢測試劑TValdecoxib1816952帕瑞考昔

腸道病毒71型(EV71)實(shí)時熒光PCR檢測試劑TUzarigenin4669

柯薩奇病毒A16型（CA16）實(shí)時熒光PCR檢測試劑TUzarigenin digitaloside6121

柯薩奇病毒A型（CA）實(shí)時熒光PCR檢測試劑Tucralose5383三氯蔗糖

柯薩奇病毒A6型(CA6)實(shí)時熒光PCR檢測試劑TTryptophan1534
Floribundone 1  118555-84-3  中文名：  分子式：C32H22O10    Humanphospho-exacellularsignal-regulatedkinase,pERKELISAKit人0酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Rubianthraquinone  644967-44-2  中文名：  分子式：C16H12O5    兔子凝血酶受體()ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

6-Hydroxyrubiadin  87686-86-0  中文名：6-羥基甲基異茜草素  分子式：C15H10O5    Rat fibrinogen degradation product (FDP) ELISA Kit 大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒

1,5,15-Tri-O-methylmorindol  942609-65-6  中文名：  分子式：C18H16O6    Humanai-perinuclearfactor,APFELISAKit 人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Rubiadin  117-02-2  中文名：甲基異茜草素  分子式：C15H10O4    HumandopamineD2receptor,D2RELISA試劑盒人多巴胺D2受體(D2R)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
雙氯芬酸鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）  Diclofenac   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品 RNA聚烯酰胺凝膠電泳試劑盒10

加巴噴丁  Gabapentin  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,USP30 RNA酶溶液(RNA酶保護(hù)分析)50毫升

加巴噴丁（標(biāo)準(zhǔn)品）  Gabapentin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RNA清除試劑盒100

多潘立酮  Domperidone  質(zhì)量規(guī)格：>99%,EP5.0 RNA探針聚合酶標(biāo)記試劑盒10

多潘立酮（標(biāo)準(zhǔn)品）  Domperidone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 RNA探針同位素([α32P]CTP)聚合酶標(biāo)記試劑盒20

氯硝柳胺  Niclosamide  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR RNA樣品儲存液50毫升

氯硝柳胺(標(biāo)準(zhǔn)品)  Niclosamide  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RNA樣品儲存液50毫升

環(huán)丙沙星  Ciprofloxacin  質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng) RNA熒光(RiboGreen)定量檢測試劑盒20

環(huán)丙沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ciprofloxacin  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RNA熒光(RiboGreen)定量檢測試劑盒20

泛昔洛韋  Famciclovir  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR RPE蛋白標(biāo)記試劑盒(不含RPE)3(1毫克/)
宮頸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物培養(yǎng)髓過氧化物酶（MPO）測定試劑盒  Ranolazine  中文名：雷諾嗪  分子式：C24H33N3O4 

酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  Withanolide S  63139-16-2  中文名：醉茄內(nèi)酯S  分子式：C28H40O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  南非醉茄; 睡茄交酯; 睡茄內(nèi)酯; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

酸性酯酶染液   Eosinstain  4,4'-Diaminodiphenylsulfone  80-08-0  中文名：4,4'-二氨基二苯砜  分子式：C12H12N2O2S  度：98.0%   

酸性品紅（復(fù)紅）   5g  4,4'-Cyclohexylidenebisphenol  843-55-0  中文名：4,4'-環(huán)亞己基雙苯酚  分子式：C18H20O2  度：98.0%   

酸性木聚糖酶測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  Testosterone enanthate  中文名：庚酸睪酮  分子式：C26H40O3