小鼠腎組織提取物培養(yǎng)

小鼠腎組織提取物【Kidney: Normal Mouse Kidney Derivatives】

腎位于脊柱兩側(cè)，緊貼腹后壁，居腹膜后方。腎屬于泌尿系統(tǒng)的一部分，負責過濾血液中的雜質(zhì)、維持體液和電解質(zhì)的平衡，后產(chǎn)生尿液經(jīng)由后續(xù)管道排出體外，同時也具備內(nèi)分泌功能以調(diào)節(jié)血壓。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠腎組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

表

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

Eppendorf 移液器1-Benzyl-ethoxyhydantoin6585521-芐基-乙氧基海因

Millipore Ultra.5超濾管個/包 2-Benzylaminopyridine693572-苯甲基氨基吡啶

Millipore Ultra5超濾管5個/包 5-BenzylH-tetrazole1848955-芐基H-四唑

Millipore Ultra超濾管5個/包 4,4'-Biphenol9284,4'-酚

NC膜Benzyl 4-hydroxybenzoate9484-羥基苯甲酸芐酯
Daturataturin A  133360-51-7  中文名：  分子式：C34H48O10    Humanparathyroidhormone-likeprotein,PLPELISAKit人甲狀旁腺激素樣蛋白(PLP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

8-Hydroxyodoroside A  176519-75-8  中文名：  分子式：C30H46O8    甲狀腺素(T4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

21-Deoxyneridienone B  924910-83-8  中文名：  分子式：C21H28O3    Human thymus expressed chemokine (TECK/CCL25) ELISA Kit 人胸腺表達趨化因子(TECK/CCL25)ELISA試劑盒

Dehydroadynerigenin glucosyldigitaloside  144223-70-1  中文名：  分子式：C36H52O13    Humanai-albuminaibody,AAAELISAKit 人抗白蛋白抗體(AAA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Tenacigenoside A  920502-42-7  中文名：  分子式：C35H56O12    Humanendotoxin,ETELISA試劑盒人內(nèi)(ET)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
蟛蜞菊內(nèi)酯 HPLC≥98% 20mg ELISAKitVD人維生素D規(guī)格：48T/96T

霹靂蘿芙木堿 HPLC≥98% 10mg ELISAKitVE-cad人血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復合體規(guī)格：48T/96T

平貝堿甲 HPLC≥98% 20mg ELISAKitVEGF-B人血管內(nèi)皮細胞生長因子B規(guī)格：48T/96T

蘋果酸 HPLC≥98% 20mg ELISAKitVEGF-C人血管內(nèi)皮細胞生長因子C規(guī)格：48T/96T

蒲公英賽醇 HPLC≥98% 20mg ELISAKitVEGF-D人血管內(nèi)皮細胞生長因子D規(guī)格：48T/96T

蒲公英甾醇 HPLC≥98% 20mg ELISAKitVEGFR-1人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體1規(guī)格：48T/96T

蒲公英甾醇乙酸酯 HPLC≥98% 10mg ELISAKitVEGFR-2人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2規(guī)格：48T/96T

普拉洛芬 HPLC≥98% 20mg ELISAKitVEGFR-3人血管內(nèi)皮細胞生長因子受體3規(guī)格：48T/96T

七葉膽苷XVII HPLC≥98% 20mg ELISAKitVEGF人血管內(nèi)皮細胞生長因子規(guī)格：48T/96T

七葉樹皂苷B HPLC≥98% 20mg ELISAKitVE人維生素E規(guī)格：48T/96T
小鼠腎組織提取物培養(yǎng)神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白elisa試劑盒   神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白試劑盒、神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  9-Anthracenylmethyl acrylate  31645-34-8  中文名：丙烯酸-9-蒽甲酯  分子式：C18H14O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒     9-Anthracenecarboxylic acid  723-62-6  中文名：9-蒽甲酸  分子式：C15H10O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  15,16-Dihydroxyoctadeca-9Z,12Z-dienoic acid  中文名：  分子式：C18H32O4  度：%

上腺髓質(zhì)素elisa試劑盒   上腺髓質(zhì)素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   上腺髓質(zhì)素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：上腺髓質(zhì)素試劑盒、上腺髓質(zhì)素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Benzoyl-L-histidine  中文名：苯甲酰基-L-組氨酸  分子式：C13H13N3O3  度：98.0%

上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒     9-Aminominocycline hydrochloride  149934-21-4  中文名：  分子式：C23H29ClN4O7  度：98.0%  關(guān)鍵詞：