產(chǎn)品名稱 | PrimaCell™人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞試劑盒價(jià)格 | 英文名稱 | | 貨號(hào) | EYX99529 |
PrimaCell™人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞試劑盒 總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。 cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。 蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明; 1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法; 2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕; 4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率; 5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作要點(diǎn); 1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。 5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。 RatFreei-iodothyronineIndes,Free-T3ELISA試劑盒大鼠游離*狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 34221-41-5刺甘草查爾酮品牌 Echinatin 小鼠組胺H4受體(HRH4)ELISA試劑盒 ,英文名: HRH4 ELISA Kit 94356-26-0曲札茋苷規(guī)格 3,5,3’,4’-trihydroxy-stilbene -3’-b-D-glucoside 山羊白介素2受體(IL-2R)ELISA檢測(cè)試劑盒GoatIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit 96T/48T 30197-14-9去氧土大黃苷 Deoxyrhapontin 犬血栓素B2(TXB2)試劑盒 Canine Thromboxane B2,TXB2 ELISA Kit 510-30-5刺囊酸說明書 Echinocystic acid 英文名稱Mouse15-lipoxygenaseELISAKit小鼠15-脂加氧酶(15-LO)規(guī)格:96T/48T 114902-16-8刺五加皂甙B品牌 Ciwujianoside B 76-66-4鉤藤堿品牌 Rhyncholphylline 組織1脂酶D2(PhospholipaseD2)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 76475-17-7Croverin規(guī)格 Croverin 組織1脂酶D1(PhospholipaseD1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20 76474-56-1二氫姜黃素品牌 DihydrocurcuMin 組織1脂酶D1(PhospholipaseD1)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 76296-75-8重樓皂苷VII品牌 Polyphyllin VII 組織1脂酶D(PhospholipaseD)總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20 76296-72-5重樓皂苷II Polyphyllin II 組織1脂酶D(PhospholipaseD)總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 Ratiercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 126105-12-2賽門苷I品牌 Siamenoside I 小鼠載脂蛋白A1(Apo A1)ELISA試劑盒 ,英文名: Apo A1 ELISA Kit 126105-11-111-0-羅漢果苷V規(guī)格 11-oxo-mogroside V 小鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseglamicaciddecarboxylaseaoaibody,GAD-AbELISAKit 96T/48T 191729-45-0通關(guān)藤苷H Tenacissoside H 人金屬硫蛋白(MT)試劑盒 Human MT ELISA Kit 882664-74-6瓜子金皂苷己說明書 Polygalasaponin F RatangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISAKit大鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 520-12-7柳穿魚黃素品牌 Pectolinarigenin PrimaCell™人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞試劑盒價(jià)格174721-08-5人參皂苷Rh4 Ginsenoside Rh4 英文名稱RatLDL-ICELISAKit大鼠低密度脂蛋白復(fù)合物(LDL-IC)規(guī)格:96T/48T 17429-69-5黃芪總皂苷 Astragaloside 英文名稱RatLDL-ICELISAKit大鼠低密度脂蛋白復(fù)合物(LDL-IC)規(guī)格:96T/48T 17406-45-0番茄堿 Tomatine 英文名稱RatLBPELISAKit大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)規(guī)格:96T/48T 17388-39-5獐牙菜苦苷品牌 Swertiamarin 英文名稱RatLaminaPropriaLymphocyteELISAKit大鼠脂蛋白脂酶(LPL)規(guī)格:96T/48T 173429-83-9補(bǔ)骨脂香豆素A規(guī)格 Ficusin A 英文名稱RatLaminaPropriaLymphocyteELISAKit大鼠脂蛋白脂酶(LPL)規(guī)格:96T/48T 運(yùn)輸和保存; 視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。 1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。 2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。 2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。 |